脂质运载蛋白2及其受体与子痫前期发病关系的研究.pdf

叶耀群 郑松柏 龙健灵 董福昌

[摘要] 目的 探討人γ干扰素诱导蛋白16（IFI16）与子痫前期（PE）的关系。 方法 选择2015年6月～2017年3月广州市番禺区何贤纪念医院（以下简称“我院”）收治的PE患者125例作为研究组，另外选择同期于我院进行体检的健康孕妇53例作为对照组。分别采用酶联免疫吸附测定法和蛋白免疫印迹法检测孕妇血清中IFI16水平和胎盘中IFI16蛋白的表达，并用Pearson相关分析PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白表达的相关性。 结果 研究组孕妇血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平均明显高于对照组（t=17.580、16.135，均P < 0.01）；与轻度PE患者相比，重度患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平均明显升高（t=18.883、 14.845，均P < 0.01）；早发型和晚发型PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平之间的差异无统计学意义（t=0.360、0.840，均P > 0.05）；PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平呈正相关（r=0.725，P < 0.05）。 结论 PE患者血清中IFI16和胎盘中IFI16蛋白表达水平异常升高，并且与疾病发展密切相关，可以作为临床诊断指标，并且为治疗PE提供新的靶点。

[关键词] 人γ干扰素诱导蛋白16；子痫前期；血清；胎盘

[中图分类号] R730.231 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）04（c）-0094-04

The relationship between human-induced protein 16 and preeclampsia

YE Yaoqun1 ZHEN Songbai2 LONG Jianling2 DONG Fucang2

1.Department of Obstetrics and Gynecology， Panyu District He Xian Memorial Hospital of Guangzhou， Guangdong Province， Guangzhou 511400， China； 2.Test Center Laboratory， Guangzhou Huayin Medical Testing Center Co. Ltd.， Guangdong Province， Guangzhou 511400， China

[Abstract] Objective To explore the relationship between human interferon-inducible protein 16 （IFI16） and the onset of preeclampsia （PE）. Methods From June 2015 to March 2017， 125 patients with PE in Panyu District He Xian Memorial Hospital of Guangzhou （"our hospital" for short） were selected as the research group. In addition， 53 cases of healthy pregnant women in our hospital during the same period were treated as control group. The levels of IFI16 in serum and IFI16 protein expression in the placenta of pregnant women were detected by enzyme-linkedimmunosorbent assay and Western blotting respectively. The correlation between the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of pregnant women with PE was analyzed by Pearson. Results The levels of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of research group were significantly higher than those in the control group （t=17.580， 16.135， all P < 0.01）. Compared with patients of mild PE， the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of patients with severe PE significantly increased （t=18.883， 14.845， all P < 0.01）. There were no statistically significant differences of the level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta between early onset and late onset （t=0.360， 0.840， all P > 0.05）. The expression levels of IFI16 in the serum of PE patients were positively correlated with the expression level of IFI16 in the placenta （r=0.725， P < 0.05）. Conclusion The level of IFI16 in serum and the expression of IFI16 in the placenta of patients with PE are abnormally elevated， they are closely related to the disease development， which can be used as a clinical diagnosis of indicator and provide a new target for the treatment of PE.

[Key words] Human interferon-inducible protein 16； Preeclampsia； Serum； Placenta

子痫前期（preeclampsia，PE）是妊娠期高血压疾病中常见的类型，目前全球的发病率为3%～12%，是导致孕产妇和新生儿死亡的重要原因之一[1]。临床主要表现为妊娠20周后出现高血压、蛋白尿或多系统器官损伤、胎儿生长受限等，重度PE危险性更大，是导致我国孕产妇死亡的第二大原因[2-3]。虽然大部分子痫前期患者血压在分娩后12周内会恢复正常，但是造成母婴不良结局，目前临床上主要采用解痉、降压、扩容、利尿、糖皮质激素、终止妊娠等综合方法[4]。PE的发生为2个阶段：第一阶段，胎盘灌注量减少；第二阶段，激活和/或损害孕妇的血管内皮细胞，导致周边多个系统不同程度的损伤[5]。PE的发病机制复杂，其病因尚未完全明确，其发病机制主要分为以下4个方面[6-7]：①血管内皮功能受损；②免疫炎症活动过度；③抑制新生血管的形成；④胰岛素抵抗。近年来，人γ干扰素诱导蛋白16（interferon-inducible protein 16，IFI16）在PE的发生过程中发挥重要作用，但是其与PE的关系研究并不多见[8-9]。本研究中通过检测不同PE患者血清和胎盘中IFI16表达水平，观察其与PE的关系，为临床诊断和治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年6月～2017年3月广州市番禺区何贤纪念医院（以下简称“我院”）收治的PE患者125例，作为研究组，所有患者的诊断及分类标准均符合第八版《妇产科学》[10]，纳入标准：①均为单胎妊娠；②患者临床资料完整，且依从性高；③经患者及其家属同意，并签署知情同意书。排除标准：①合并心、肝、肾等重大脏器病变患者；②精神意识障碍患者；④入组前1个月服用抗炎和降压药物进行治疗。入组患者年龄25～35岁，平均（27.69±2.34）岁；孕龄32～39周，平均（36.04±2.14）周；严重程度：轻度75例，重度50例；疾病类型：早发型（孕龄<34周）36例，晚发型（孕龄≥34周）89例。另外选择同期于我院进行体检的健康孕妇53例作为对照组，年龄25～34岁，平均（27.53±2.28）岁；孕龄32～38周，平均（36.06±2.23）周。两组孕妇的年龄和孕龄差异无统计学意义（P > 0.05）。所有研究过程均符合我院医学伦理委员会的相关规定。PE严重程度评价按照文献[10]标准。轻度PE：妊娠20周后血压水平不低于140/90 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），24 h尿蛋白水平不低于0.3 g或随机尿蛋白呈阳性（+），同时伴随出现上腹部疼痛和头痛等症状。重度PE：妊娠20周后血压水平不低于160/110 mmHg，24 h尿蛋白水平不低于2.0 g或随机尿蛋白呈阳性（++），血肌酐含量高于106 μmol/L，血小板低于100×109/L，血清中谷丙转氨酶水平升高，视觉障碍及持续性上腹部疼痛。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 IFI16试剂盒购自美国Sigma公司，酶标仪为美国Thermo公司生产的VARIOSKAN FLASH Elx800型，鼠抗人IFI16单克隆抗体购自美国Abcam公司（工作浓度1︰200），兔二抗和PVDF膜由北京中杉金桥生物技术有限公司提供，蛋白裂解液试剂盒和ECL显色液购自北京索莱宝科技有限公司。

1.2.2 血清IFI16水平检测 所有孕妇均于入院次日清晨空腹抽取肘正中静脉血3 mL，置于未涂肝素钠的采血管中，室温下静置20 min，以3500 r/min的速度离心10 min，离心半径为13 cm，分离上清液即得血清，置于-80℃冰箱中待测。采用酶联免疫吸附测定法检测孕妇血清中IFI16水平，严格按照试剂盒的说明书进行操作。

1.2.3 胎盘中IFI16蛋白的表达 孕妇分娩结束后，保留胎盘组织，采用蛋白免疫印迹法检测胎盘中IFI16蛋白的表达，使用蛋白裂解液试剂盒提取胎盘组织中的蛋白，应用Bradford法检测其浓度。取100 μg样品进行SDS-PAGE电泳蛋白后转移至PVDF膜上，在4℃下5%脱脂奶粉封闭过夜，一抗为鼠抗人IFI16单克隆抗体（工作浓度1︰200），使用TBST缓冲液冲洗3次，然后在膜上加IRDye680LT标记的羊抗鼠抗体（工作浓度1︰2000），37℃孵育2 h，加入ECL显色液进行显色并曝光，使用美国LICOR公司Odyssey双色红外激光成像系统计算条带的灰度值，内参为β-actin，使用两者的比值表示IFI16蛋白的相对表达水平。

1.2.4 观察分析方法 比较健康孕妇和PE孕妇血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达情况，同时比较不同程度和不同类型PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达情况，另外比较PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白表达的相关性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，采用Pearson系数进行相关性分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平比较

研究组孕妇血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.01）。见表1。

2.2 不同程度PE患者血清中IFI16水平及胎盤中IFI16蛋白的表达水平比较

与轻度PE患者相比，重度患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平均明显升高，差异有统计学意义（P < 0.01）。见表2。

2.3 不同类型PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平比较

早发型和晚发型PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表3。

2.4分析PE患者血清中IFI16水平与胎盘中IFI16蛋白的表达水平的相关性

PE患者血清中IFI16水平与胎盘中IFI16蛋白的表达水平呈正相关（r=0.725，P=0.027）。

3 讨论

PE被认为是母体系统性的炎性反应，正常妊娠过程中，母胎界面发生变化从而适应激活的炎症免疫反应，有利于建立并维持正常的妊娠，同样，炎症免疫反应在PE的发病过程中起着重要作用[11]，孕妇出现PE后，免疫平衡系统被打破，炎性反应增强，激活大量的炎症细胞，并且黏附在血管上，产生严重的炎性反应，损伤血管内皮细胞，使得血管重铸发生异常[12-13]。PE发病前期，内细胞损伤是重要环节，但是内细胞损伤的发病机制尚未明确，研究发现[14]，内皮细胞中的IFI16参与抑制细胞分化、增殖及凋亡的过程，在外界因素的影响下，IFIF16从细胞内转移到细胞外，血清中高浓度的IFI16水平参与内皮细胞损伤，推测IFI16是血管性疾病的重要调控因子。

干扰素结合相应的受体，诱导干扰素相关蛋白的表达，从而发挥免疫调节、加速细胞凋亡及抑制细胞增殖的作用[15]。干扰素γ诱导蛋白200家族包括13个鼠成员蛋白，如p202a、p202b、p203、p204等，和5个人成员蛋白，如IFI16、AIM2、MNDA、PYHIN1，该家族蛋白主要对于各类免疫反应、细胞周期调节、细胞生长及分化中发挥重要作用[16]。IFI16作为干扰素γ诱导蛋白200家族成员之一，基因编码定位于1q21～23，主要出现在成纤维细胞、上皮细胞、造血细胞和内皮细胞的细胞质或细胞核内，是细胞内双链DNA的免疫受体，参与细胞生长、凋亡、衰老及血管形成等过程[17-18]。本研究结果发现，研究组孕妇血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平均明显高于对照组（P < 0.05），推测可能是因为PE患者处于高炎性反应和氧化应激状态，导致血清IFI16及胎盘中IFI16蛋白的高表达[5]。结果还发现，随着PE严重程度的加重，血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平显著升高（P < 0.05）。这与朱敏等[6]的研究结果一致，IFI16的氨基端有一个DAPIN结构域，由88个氨基酸组成，这个结构域通过介导干扰素的应答反应、细胞凋亡及炎性信号通路蛋白的集合从而影响细胞凋亡及炎症反应的功能[19]，同时氨基端PYRIN结构域与衔接蛋白ASC结合，形成活化的炎症小体，激活caspase-1，上调白细胞介素-1β和白细胞介素-18，激活机体的免疫反应[20]，另外IFI16结合细胞周期相关蛋白，调控信号通路，减慢细胞周期的发展，加速细胞衰老和凋亡，从而发挥细胞的生长及周期调节作用[16]。早发型和晚发型PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平之间的差异无统计学意义（P > 0.05），这可能与选择病例的范围及特点有段，或者是选择样本量较小导致的后期研究中需要扩大样本量和样本选择的范围进一步研究。另外，PE患者血清中IFI16水平及胎盘中IFI16蛋白的表达水平呈正相关（P < 0.05），可能是因为受到外界因素的影响，细胞坏死，胎盘中的IFI6蛋白表达水平升高，通过胎盘和血液的屏障，进入血液循环系统[5]。

综上所述，IFI16在PE患者的血清及胎盘中表达水平升高，并且与PE的严重程度密切相关，为临床上诊断PE提供新的指标，同时为治疗PE开拓新的治疗思路。

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（收稿日期：2018-01-18 本文编辑：任 念）