清热解毒类中成药中非法添加化学药品的检测方法研究.pdf

周斌　吴萍　王元辉

【摘要】目的：对同时检测降糖类中药制剂中盐酸二甲双胍等6种化学药品的高校液相色谱法（HPLC）进行探究。方法：色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm×4.6mm，5um）；取1.4ml三乙胺加入到0.5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3.5±0.05配成离子对试液；再以甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速控制为1.0ml/min；检测波长为233nm。结果：降糖类中药制剂中的6种化学药品分离良好，且在一定的进样量范围内呈现良好的现行。结论：本实验采用的HPLC简便快速，能够对6种不同的化学药品进行定量及定性的分析，因而，可作为降糖中药制剂中是否添加化学药品的鉴定方法。

【关键词】降糖重要制剂；高校液相色谱法（HPLC）；化学药品

大多数糖尿病患者认为，中药降糖药较为温和且副作用小，因而大多选择服用纯中药降糖制剂。可近年来，不少不法商家暗自添加化学药品以提高药物品质，这种做法不仅严重违反了国家相关法律法规，还极易造成药害事故，从而对糖尿病患者生命造成威胁[1]。因此，建立灵敏可靠的非法添加化学药品的检测方法显得至关重要；本实验利用DNA检测器，采用高效液相色谱法，建立了降糖中药制剂中6种常用化学药品的检测方法。现报告如下。

试剂与仪器

试剂：格列喹酮、格列齐特、格列吡嗦、格列本脲对照品（批号分别为：100280-200301，100269-200402，100281-0001，100135-200404，且均由中国药品生物制品检定所提供）；盐酸苯乙双胍含量为99.4%，生产批号为：0606001，由山东科源制药有限公司提供；盐酸二甲双胍由天津新新药业集团有限公司提供，其浓度为99.1%，生产批号为：20040407；庚烷磺酸钠及甲醇均为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为重蒸水；样品为市售降糖中药制剂。

仪器设备：Agilent 1100型高效液相色谱仪；GI313A自动进样器；GI311A泵；GI379A真空脱气机；GI315BDAD检测器；GI316A柱温箱；Chem Station A.10.01色谱工作站；PHS-3C型精密酸度计；BP211D电子天平。

方法与结果

色谱条件：色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm×4.6mm，5um）；取1.4ml三乙胺加入到0.5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3.5±0.05配成离子对试液（以下同）；甲醇为流动相，梯度洗脱的时间与比例控制为（0～3min，70：30；3～6min，70：30～25：75；6～13min，25：75；13～17min，25：75～70：30；17～30min，70：30），流速控制为1.0ml·min-1。进样量为20ul，柱温为室温，检测波长为233nm，且理论板数按6个对照品峰计算均不低于2000。因此，6个对照品与样品在该色谱条件下均能得到很好的分离，供试液色谱图减去相应溶剂色谱图所得峰图表。

对照品溶液的制备[2]：精确称取6种化学品各10mg于同一100ml容量瓶中，加入70ml甲醇，超声溶解15min，之后再用甲醇定容，摇匀，作为对照品储备液备用；精确吸取10ml对照品储备液于25ml容量瓶中，甲醇定容摇匀，作为对照品溶液备用（6种化学药品在1ml对照品溶液各占40μg）。

线性关系考察：精确吸取2、5、10、20、40、80、100ul对照品储备液，按设定好的色谱条件进行测定，记录峰面积。以6种化学品的进样量（μg）为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，进行线性回归。见表1。

样品测定结果：对临床上常使用的民间降糖中药丸、麦冬消渴胶囊、消渴降糖片、糖尿乐胶囊（片）等16个品种24个样品进行测定，每种样品取2粒（片）于研钵中研细，分次加入10ml甲醇研磨，并转移至25ml容量瓶中，超声溶解15min后加离子对试液定容，摇匀并过滤，滤液为供试品溶液，分别在设定的色谱条件下进行测定。经三维光谱图、紫外光谱图及液相色谱图分析得出，20个样品中均为检出6中化学药品；3个样品中含有格列吡嗦，其浓度分别为134，21，78.9ug/ml，1个样品中同时含有盐酸苯乙双胍和格列吡嗦，其浓度分别为117.1，27.3ug/ml）。

加样回收率试验：①供试品溶液的制备：糖尿乐胶囊20粒，去除胶囊壳，研细内容物，精密称量10粒量于50ml容量瓶中，加入适量甲醇后超声溶解15min，冷却后用甲醇溶液定容，摇匀并过滤；精确量取10ml滤液于25ml量瓶中，在分别加入事先已量取好的1、2、5、10ml对照品储备液，并用离子对试液稀释至刻度线，摇匀即可。消渴降糖片20片，制备方法同上。②测定法：精确吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，按上述色谱条件测定，记录冯面积，见表2。

讨论

本实验中盐酸二甲双胍出峰早，受中药制剂中的中极性成分干扰大，因而无法检出，有待其他学者进一步研究测定。

本实验中由于6种成分的极性相差较大，且中药成分颇为复杂，故利用梯度洗脱的方法进行测定，从本实验的结果可知，6种降糖成分与中药能够较好分离。

参考文献

[1]李雪靖，潘颖.降糖中成药中非法添加化学药品的HPLC法快速检测[J].河北医药，2008，30（6）.

[2]许奇，缪刚.HPLC法快速筛选降糖类中成药及保健品中非法加入的化学药品[J].中国现代医药应用，2010，4（9）.

【摘要】目的：对同时检测降糖类中药制剂中盐酸二甲双胍等6种化学药品的高校液相色谱法（HPLC）进行探究。方法：色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm×4.6mm，5um）；取1.4ml三乙胺加入到0.5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3.5±0.05配成离子对试液；再以甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速控制为1.0ml/min；检测波长为233nm。结果：降糖类中药制剂中的6种化学药品分离良好，且在一定的进样量范围内呈现良好的现行。结论：本实验采用的HPLC简便快速，能够对6种不同的化学药品进行定量及定性的分析，因而，可作为降糖中药制剂中是否添加化学药品的鉴定方法。

【关键词】降糖重要制剂；高校液相色谱法（HPLC）；化学药品

大多数糖尿病患者认为，中药降糖药较为温和且副作用小，因而大多选择服用纯中药降糖制剂。可近年来，不少不法商家暗自添加化学药品以提高药物品质，这种做法不仅严重违反了国家相关法律法规，还极易造成药害事故，从而对糖尿病患者生命造成威胁[1]。因此，建立灵敏可靠的非法添加化学药品的检测方法显得至关重要；本实验利用DNA检测器，采用高效液相色谱法，建立了降糖中药制剂中6种常用化学药品的检测方法。现报告如下。

试剂与仪器

试剂：格列喹酮、格列齐特、格列吡嗦、格列本脲对照品（批号分别为：100280-200301，100269-200402，100281-0001，100135-200404，且均由中国药品生物制品检定所提供）；盐酸苯乙双胍含量为99.4%，生产批号为：0606001，由山东科源制药有限公司提供；盐酸二甲双胍由天津新新药业集团有限公司提供，其浓度为99.1%，生产批号为：20040407；庚烷磺酸钠及甲醇均为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为重蒸水；样品为市售降糖中药制剂。

仪器设备：Agilent 1100型高效液相色谱仪；GI313A自动进样器；GI311A泵；GI379A真空脱气机；GI315BDAD检测器；GI316A柱温箱；Chem Station A.10.01色谱工作站；PHS-3C型精密酸度计；BP211D电子天平。

方法与结果

色谱条件：色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm×4.6mm，5um）；取1.4ml三乙胺加入到0.5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3.5±0.05配成离子对试液（以下同）；甲醇为流动相，梯度洗脱的时间与比例控制为（0～3min，70：30；3～6min，70：30～25：75；6～13min，25：75；13～17min，25：75～70：30；17～30min，70：30），流速控制为1.0ml·min-1。进样量为20ul，柱温为室温，检测波长为233nm，且理论板数按6个对照品峰计算均不低于2000。因此，6个对照品与样品在该色谱条件下均能得到很好的分离，供试液色谱图减去相应溶剂色谱图所得峰图表。

对照品溶液的制备[2]：精确称取6种化学品各10mg于同一100ml容量瓶中，加入70ml甲醇，超声溶解15min，之后再用甲醇定容，摇匀，作为对照品储备液备用；精确吸取10ml对照品储备液于25ml容量瓶中，甲醇定容摇匀，作为对照品溶液备用（6种化学药品在1ml对照品溶液各占40μg）。

线性关系考察：精确吸取2、5、10、20、40、80、100ul对照品储备液，按设定好的色谱条件进行测定，记录峰面积。以6种化学品的进样量（μg）为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，进行线性回归。见表1。

样品测定结果：对临床上常使用的民间降糖中药丸、麦冬消渴胶囊、消渴降糖片、糖尿乐胶囊（片）等16个品种24个样品进行测定，每种样品取2粒（片）于研钵中研细，分次加入10ml甲醇研磨，并转移至25ml容量瓶中，超声溶解15min后加离子对试液定容，摇匀并过滤，滤液为供试品溶液，分别在设定的色谱条件下进行测定。经三维光谱图、紫外光谱图及液相色谱图分析得出，20个样品中均为检出6中化学药品；3个样品中含有格列吡嗦，其浓度分别为134，21，78.9ug/ml，1个样品中同时含有盐酸苯乙双胍和格列吡嗦，其浓度分别为117.1，27.3ug/ml）。

加样回收率试验：①供试品溶液的制备：糖尿乐胶囊20粒，去除胶囊壳，研细内容物，精密称量10粒量于50ml容量瓶中，加入适量甲醇后超声溶解15min，冷却后用甲醇溶液定容，摇匀并过滤；精确量取10ml滤液于25ml量瓶中，在分别加入事先已量取好的1、2、5、10ml对照品储备液，并用离子对试液稀释至刻度线，摇匀即可。消渴降糖片20片，制备方法同上。②测定法：精确吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，按上述色谱条件测定，记录冯面积，见表2。

讨论

本实验中盐酸二甲双胍出峰早，受中药制剂中的中极性成分干扰大，因而无法检出，有待其他学者进一步研究测定。

本实验中由于6种成分的极性相差较大，且中药成分颇为复杂，故利用梯度洗脱的方法进行测定，从本实验的结果可知，6种降糖成分与中药能够较好分离。

参考文献

[1]李雪靖，潘颖.降糖中成药中非法添加化学药品的HPLC法快速检测[J].河北医药，2008，30（6）.

[2]许奇，缪刚.HPLC法快速筛选降糖类中成药及保健品中非法加入的化学药品[J].中国现代医药应用，2010，4（9）.

【摘要】目的：对同时检测降糖类中药制剂中盐酸二甲双胍等6种化学药品的高校液相色谱法（HPLC）进行探究。方法：色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm×4.6mm，5um）；取1.4ml三乙胺加入到0.5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3.5±0.05配成离子对试液；再以甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速控制为1.0ml/min；检测波长为233nm。结果：降糖类中药制剂中的6种化学药品分离良好，且在一定的进样量范围内呈现良好的现行。结论：本实验采用的HPLC简便快速，能够对6种不同的化学药品进行定量及定性的分析，因而，可作为降糖中药制剂中是否添加化学药品的鉴定方法。

【关键词】降糖重要制剂；高校液相色谱法（HPLC）；化学药品

大多数糖尿病患者认为，中药降糖药较为温和且副作用小，因而大多选择服用纯中药降糖制剂。可近年来，不少不法商家暗自添加化学药品以提高药物品质，这种做法不仅严重违反了国家相关法律法规，还极易造成药害事故，从而对糖尿病患者生命造成威胁[1]。因此，建立灵敏可靠的非法添加化学药品的检测方法显得至关重要；本实验利用DNA检测器，采用高效液相色谱法，建立了降糖中药制剂中6种常用化学药品的检测方法。现报告如下。

试剂与仪器

试剂：格列喹酮、格列齐特、格列吡嗦、格列本脲对照品（批号分别为：100280-200301，100269-200402，100281-0001，100135-200404，且均由中国药品生物制品检定所提供）；盐酸苯乙双胍含量为99.4%，生产批号为：0606001，由山东科源制药有限公司提供；盐酸二甲双胍由天津新新药业集团有限公司提供，其浓度为99.1%，生产批号为：20040407；庚烷磺酸钠及甲醇均为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为重蒸水；样品为市售降糖中药制剂。

仪器设备：Agilent 1100型高效液相色谱仪；GI313A自动进样器；GI311A泵；GI379A真空脱气机；GI315BDAD检测器；GI316A柱温箱；Chem Station A.10.01色谱工作站；PHS-3C型精密酸度计；BP211D电子天平。

方法与结果

色谱条件：色谱柱采用Hypersil BDS C18，其规格为（200mm×4.6mm，5um）；取1.4ml三乙胺加入到0.5g的庚烷磺酸钠中，加水定容至1000ml，再用磷酸调节PH至3.5±0.05配成离子对试液（以下同）；甲醇为流动相，梯度洗脱的时间与比例控制为（0～3min，70：30；3～6min，70：30～25：75；6～13min，25：75；13～17min，25：75～70：30；17～30min，70：30），流速控制为1.0ml·min-1。进样量为20ul，柱温为室温，检测波长为233nm，且理论板数按6个对照品峰计算均不低于2000。因此，6个对照品与样品在该色谱条件下均能得到很好的分离，供试液色谱图减去相应溶剂色谱图所得峰图表。

对照品溶液的制备[2]：精确称取6种化学品各10mg于同一100ml容量瓶中，加入70ml甲醇，超声溶解15min，之后再用甲醇定容，摇匀，作为对照品储备液备用；精确吸取10ml对照品储备液于25ml容量瓶中，甲醇定容摇匀，作为对照品溶液备用（6种化学药品在1ml对照品溶液各占40μg）。

线性关系考察：精确吸取2、5、10、20、40、80、100ul对照品储备液，按设定好的色谱条件进行测定，记录峰面积。以6种化学品的进样量（μg）为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，进行线性回归。见表1。

样品测定结果：对临床上常使用的民间降糖中药丸、麦冬消渴胶囊、消渴降糖片、糖尿乐胶囊（片）等16个品种24个样品进行测定，每种样品取2粒（片）于研钵中研细，分次加入10ml甲醇研磨，并转移至25ml容量瓶中，超声溶解15min后加离子对试液定容，摇匀并过滤，滤液为供试品溶液，分别在设定的色谱条件下进行测定。经三维光谱图、紫外光谱图及液相色谱图分析得出，20个样品中均为检出6中化学药品；3个样品中含有格列吡嗦，其浓度分别为134，21，78.9ug/ml，1个样品中同时含有盐酸苯乙双胍和格列吡嗦，其浓度分别为117.1，27.3ug/ml）。

加样回收率试验：①供试品溶液的制备：糖尿乐胶囊20粒，去除胶囊壳，研细内容物，精密称量10粒量于50ml容量瓶中，加入适量甲醇后超声溶解15min，冷却后用甲醇溶液定容，摇匀并过滤；精确量取10ml滤液于25ml量瓶中，在分别加入事先已量取好的1、2、5、10ml对照品储备液，并用离子对试液稀释至刻度线，摇匀即可。消渴降糖片20片，制备方法同上。②测定法：精确吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，按上述色谱条件测定，记录冯面积，见表2。

讨论

本实验中盐酸二甲双胍出峰早，受中药制剂中的中极性成分干扰大，因而无法检出，有待其他学者进一步研究测定。

本实验中由于6种成分的极性相差较大，且中药成分颇为复杂，故利用梯度洗脱的方法进行测定，从本实验的结果可知，6种降糖成分与中药能够较好分离。

参考文献

[1]李雪靖，潘颖.降糖中成药中非法添加化学药品的HPLC法快速检测[J].河北医药，2008，30（6）.

[2]许奇，缪刚.HPLC法快速筛选降糖类中成药及保健品中非法加入的化学药品[J].中国现代医药应用，2010，4（9）.