气相色谱法分析测定药品中残留溶剂

庞文哲 王强 杨天风 张菁 韩彬

【摘要】 目的 探讨气相色谱法测定环孢素软胶囊中乙醇及丙二醇的含量。方法 采用Rtx-Wax毛细管色谱柱， 检测器为：FID， 40℃保持3 min， 以10℃/min的速率升至90℃， 再以5℃/min的速率升至180℃， 进样口温度为200℃， 检测器温度为260℃， 载气为氮气， 以二甲基亚砜为溶剂， 以正丙醇为内标。结果 乙醇浓度在0.8～2.4 mg/ml范围内， 丙二醇浓度在0.3～1.8 mg/ml范围内， 线性关系良好， 回收率为92.0%～101.0%， 准确度良好。结论 建立气相色谱法测定环孢素软胶囊中的残留溶剂， 操作简便， 灵敏度高， 结果准确可靠。

【关键词】 环孢素软胶囊；气相色谱法；残留溶剂

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.11.116

【Abstract】 Objective To discuss the content of residual solvents in cyclosporine soft capsules by gas chromatography. Methods Rtx-Wax was used as the capillary column， with detector as FID， 40 ℃ keep 3 minutes， then up to 90 ℃ by rate of 10℃/min， then up to 180℃ by rate of 5℃/min， with inlet temperature as 200 ℃ and temperature of the detector as 260 ℃. The carrier gas was nitrogen， the methyl sulfoxide was used as the solvent and the propanol as the internal standard. Results The ethanol concentration ranged 0.8 ～ 2.4 mg/ml， and the concentration of propylene glycol ranged 0.3 ～ 1.8 mg/ml. The linear relationship was good， the recovery rate was 92% ～ 101%， and the accuracy was good. Conclusion The determination of content of residual solvents in cyclosporin soft capsules by gas chromatography is simple and sensitive， and the result is accurate and reliable.

【Key words】 Cyclosporine soft capsules； Gas chromatography； Residual solvents

环孢素软胶囊是一种免疫抑制剂， 适用于预防同种异体肾、肝、心、骨髓等器官或组织移植时发生的移植物抗宿主反应[1， 2]。本文根据中国药典2015年版的相关规定， 并参考相关文献[3， 4]， 建立了气相色谱法测定环孢素软胶囊中的残留溶剂， 操作简便， 准确度高。

1 仪器与试药

气相色谱仪（GC-2010， 日本岛津公司）， Mettler TOLEDO型电子天平[梅特勒-托利多（上海）有限公司]。环孢素软胶囊样品提供厂家： A（规格：25 mg）；B（规格：25 mg）；C（规格：25、50 mg）；D（规格：25、50 mg）；E（规格：10、25、50 mg）；F（规格：25、50 mg）。乙醇、异丙醇、丙二醇均为气相色谱纯， 二甲基亚砜为色谱纯。

2 试验方法与结果

2. 1 色谱条件 Rtx-Wax毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm× 0.25 μm）；氢火焰离子化检测器；40℃保持3 min， 以10℃/min的速率升至90℃， 再以5℃/min的速率升至180℃， 进样口温度为200℃， 检测器温度为260℃；载气为氮气；进样量1 μl。

2. 2 系统适用性试验 取对照品溶液1 μl注入气相色谱仪， 出峰顺序为：乙醇、正丙醇、二甲基亚砜、丙二醇， 乙醇、丙二醇及正丙醇的保留时间分别为4.8、6.2、17.4 min， 乙醇与正丙醇间、二甲基亚砜与丙二醇间均可达到良好的分离。见图1。

2. 3 溶液的制备 内标溶液的制备：量取正丙醇1 ml， 置50 ml量瓶中， 加二甲基亚砜稀释至刻度， 摇匀。对照品溶液的制备：分别精密称取气相级的乙醇及丙二醇约500 mg置50 ml量瓶中， 加二甲基亚砜至刻度， 摇匀， 再精密量取10 ml置50 ml量瓶中， 加入内标溶液5 ml， 用上述溶剂稀释至刻度， 摇匀， 作为对照品溶液。

2. 4 线性范围及标准曲线 标准贮备液的制备：精密称取气相级的乙醇2.0 g， 丙二醇1.5 g， 分别置50 ml量瓶中， 加二甲基亞砜至刻度， 摇匀。内标贮备液的制备：精密量取正丙醇5.0 ml置50 ml量瓶中， 加二甲基亚砜至刻度， 摇匀。分别精密量取乙醇和丙二醇标准贮备液0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 ml，分别置50 ml 量瓶中， 并分别加入内标贮备液1.0 ml， 使乙醇终浓度为0.4、0.8、1.2、1.6、2.4 mg/L， 丙二醇的终浓度为0.3、0.6、0.9、1.2、1.8 mg/ml， 分别进1 μl， 以乙醇及丙二醇的进样量为横坐标， 以其峰面积与内标峰面积之比为纵坐标， 分别进行线性回归， 结果线性关系良好， 乙醇、丙二醇回归方程分别为：Y=0.0081X -0.0149（r=0.9996）；Y=0.0072X -0.0169（r=0.9985）。

2. 5 精密度试验 用乙醇浓度为2.0 mg/ml的溶液， 重复进样5次， 结果乙醇的RSD为1.1%；丙二醇浓度为1.5 mg/ml的溶液， 重复进样5次， 结果丙二醇的RSD为1.3%， 精密度良好。

2. 6 回收率试验 乙醇检测浓度为1.0、1.5、2.0 mg/ml， 丙二醇检测浓度为0.5、1.0、1.5 mg/ml， 计算回收率， 检测结果显示， 回收率为92.0%～101.0%， 该方法准确度良好。

2. 7 样品的测定 取本品内容物适量， 精密称定， 移至50 ml量瓶中， 加内标溶液5 ml， 用上述溶剂稀释至刻度， 摇匀， 按标示量制成每1毫升中约含乙醇和丙二醇各2 mg的溶液， 作为供试品溶液。分别量取对照品溶液和样品溶液1 μl， 注入气相色谱仪， 按上述色谱条件测定， 6批环孢素软胶囊残留溶剂的测定结果均低于标示量的120.0%。

3 小结

本实验建立的气相色谱法专属性强， 准确度、精密度较好， 能有效的分离待测物与内标物， 有利于控制环孢素软胶囊和残留溶剂。本法采用二甲基亚砜为溶剂， 能使样品完全溶解， 同时能与丙二醇峰完全分离， 符合定量分析的要求。

作者在预实验时比较了Rtx-Wax和DB-624毛细管色谱柱， 对比这两种有机溶剂的分离效果。结果显示， 使用Rtx-Wax毛细管柱， 乙醇和丙二醇峰的分离效果较好。方法中采用程序升温， 可使溶剂出峰时间加快， 缩短分析时间。

参考文献

[1] 王俊秋， 庞青云， 余立.气相色谱法分离测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量. 药物分析杂志， 2000， 20（1）：95-97.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2015年版.四部.北京：中国医药科技出版社， 2015：105-109.

[3] Van Breemen RB， Yuan Y， Banuvar S， et al. Pharmacokinetics of prenylated hop phenols in women following oral administration of a standardized extract of hops. Molecular Nutrition & Food Research， 2015， 58（10）：1962-1969.

[4] 馬秋平， 王敏力， 侯继锋， 等.气相色谱法检测重组人血白蛋白中异丙醇残留量.中国生物制品学杂志， 2017， 30（8）：847-854.

[收稿日期：2017-12-21]