神经元特异性烯醇化酶测定影响因素的研究及在肺癌检测中的应用 佟素...
卢志芳++杨先凯
【摘要】目的 本文旨在探讨影响神经元特异性烯醇化酶（NSE） 测定结果的因素。方法 根据受试者样本放置时间，溶血程度，黄疸程度的不同，采用化学发光免疫法测定各组NSE水平，通过统计学方法进行数据分析。结果 正常人和3例小细胞肺癌患者血液标本分别放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h，NSE检测结果差异有统计学意义（P<0.05）；溶血对NSE的测定影响很大，且溶血的标本中每增加1 g血红蛋白（Hb）就可测定出32.45 ng/mL的的NSE；不同浓度的黄疸样本检测结果与对照组结果差异无统计学意义（P>0.05）。
结论 NSE的测定受外界因素影响，会出现假阳性，并影响到临床诊疗。在实际工作中，应避免溶血，且及时送检并分离血清从而提高结果的准确性。
【关键词】神经元特异性烯醇化酶（NSE）；化学发光免疫检测；标本；影响因素；
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】B 【文章编号】ISSN.2095-6681.2016.34..02
作为烯醇化酶的同工酶，神经元特异性烯醇化酶（NSE）被公认是监测小细胞肺癌的首选标志物。另一方面NSE同神经损伤所致的许多神经性疾病关系密切[1-2]。由于红细胞和血小板中同时存在着NSE，血细胞的异常代谢活动， 会导致血清中NSE的成分发生变化。因此在测定中，应避免外界因素干扰血清中NSE的原有水平，从而影响实验结果[3]。本研究旨在探討影响NSE检测的影响因素，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
标本：健康体检者30例，男性20例，女性10例，年龄20～40岁，均无抽烟史，无基础病；小细胞肺癌患者3例，为2016年4～10月确诊的我院男性住院患者，年龄45～60岁。自制溶血标本：取无溶血的正常人混合血清标本，人工使其溶血后高速离心，取上清备用。自制黄疸标本：取无溶血的正常人混合血清标本，人工加入特定含量胆红素备用。
1.2 试剂与仪器
NSE试剂盒为化学发光免疫法，深圳市新产业生物医学工程股份有限公司提供；化学发光免疫测定仪器，深圳新产业生物医学工程股份有限公司提供的MAGLUMI 2000。Mek7222k血液分析仪，日本光电公司生产。
1.3 方法
（1）早晨分别采集健康体检者和肺癌患者空腹静脉血10 mL，同一标本按放置时间不同分装四份。按深圳市新产业生物医学工程股份有限公司试剂盒说明书进行操作（试剂盒为化学发光免疫法）。健康体检人群与3例小细胞肺癌患者血清标本收集后，分别在放置0.5 h、1 h、3 h 和5 h后进行离心，检测。每次、每份标本重复测定5次，计算其均值、标准差及进行差异显著性检验。
（2）将自制的溶血标本，再次离心，取上清液用光电Mek-7222k血细胞分析仪重复测定数次，调整血红蛋白含量使其均值为4.0 mg/mL，将其倍比稀释成1.0，0.25，0.063的4个梯度。每个浓度梯度重复进行5次测定，算出其NSE均值（ng/mL）。再分别计算出每克Hb的NSE
含量（ng/mL），最后以NSE和Hb总量，计算出总平均每克Hb的NSE含量（ng/mL）。
（3）自制黄疸标本，取无溶血的正常人混合血清标本，分成6组，分别加入不同浓度的胆红素制备成梯度浓度的黄疸血清样本，40～60 μmol/L组、60～100 μmol/L 组、100～200 μmol/L组、200～300 μmol/L组、300～400μmol/L组、>400 μmol/L组各20份，进行NSE检测。
2 结 果
（1）正常人血清标本放置0.5 h，1 h，3 h，5 h后， 检测NSE含量。NSE水平最高为放置5 h的样本，随着放置时间的减少NSE明显降低，其中与0.5 hNSE结果相比，3 h和
5 h差异具有统计学意义（P<0.05）。
（2）小细胞肺癌患者NSE放置0.5 h，1 h，3 h，5 h测定结果及差异显著性。
（3）自制溶血标本NSE测定结果。
（4）不同浓度黄疸样本的NSE检测水平对比 ，结果差异均无统计学意义（P>0.05）。
3 讨 论
血清NSE是糖酵解通路中的一种肝糖分解酶，是烯醇化酶的一种同工酶，分子量为78 KD。正常存在于神经元、周围神经组织和神经内分泌组织如APUD细胞系统中[4-7]，在细胞被破坏时释放出来，可作为APUD肿瘤的特异性肿瘤标志物[7]。NSE在神经元和神经内分泌肿瘤组织中呈异常高表达。小细胞肺癌也是能够分泌NSE的APUD肿瘤之一。目前NSE被认为是小细胞肺癌、神经母细胞瘤最特异、最敏感的肿瘤标志物。同时研究证实NSE不但存在于APUD细胞系中，还存在于APUD瘤细胞系中，对NSE进行测定既可以辅助诊断小细胞肺癌、神经母细胞瘤，还可为其疗效观察和预后评价提供依据，同时还可对嗜铬细胞瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤、甲状腺髓样癌等提供诊断信息。
正常红细胞中也存在较多量的NSE，溶血标本会对结果的正常判断造成干扰[8-9]；由于红细胞破裂会释放出较多的NSE，因此溶血可引起结果偏高；同样血小板中也可释放NSE，因此，未充分离心的样本NSE的结果也会偏高等[10]。但是红细胞内含有NSE的量以及溶血会对血清NSE测定结果造成多大的影响，已经达成共识[11-12]。研究显示，每溶解红细胞释放1 g血红蛋白的量，就可以平均测定出32.45 ng/mL的NSE，属假阳性结果。可见NSE实验结果受溶血的影响很大；同时正常人和小细胞肺癌患者血清标本放置一定时间后再测定，均会导致NSE结果产生差异。而黄疸对NSE的检测结果不产生影响。
综上所述，标本溶血和标本放置过长时间对测定结果有显著影响，实践中NSE检测一定要避免标本溶血，静脉采血尽量一次成功，避免在同一部位反复穿刺，在采取标本后应尽量快速送检并分离血清且应立即进行测定。假如不能即刻测定，也应该立即分离血清，置入冰箱冷冻保存备查。目的就是尽可能避免因标本溶血和标本久置使红细胞中NSE释放进入血清，影响测定结果。
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本文编辑：李 豆
