...成分:纳米胶原蛋白、透明质酸复合因子、去离子水、辛酸、葵酸甘...
陈英++于隽++杨舟++李飞++陈果++向丽婷++向娟++彭亮
摘要：目的 观察艾灸对大鼠胃黏膜组织白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、表皮生长因子（EGF）及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响，探讨艾灸对胃黏膜的保护效应与脊髓的关系。方法 实验大鼠采用无水乙醇+阿司匹林灌胃制作胃黏膜损伤模型。将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组，每组12只。艾灸+脊髓横断组大鼠行脊髓横断手术，并予以艾灸干预。GUTH法计算胃黏膜组织损伤指数（UI），ELISA检测血清IL-1β、TNF-α和EGF含量；Western blot检测胃黏膜组织HSP70蛋白表达。结果 与模型组比较，艾灸模型组大鼠胃黏膜组织UI下降、EGF含量升高，血清IL-1β、TNF-α含量降低（P<0.05，P<0.01）；与艾灸模型组比较，艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织UI升高、EGF含量降低，血清IL-1β、TNF-α含量升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织HSP70蛋白表达均明显增加（P<0.01）。结论 脊髓是艾灸对胃黏膜损伤修复与保护因子表达的重要调节途径。
关键词：脊髓横断术；艾灸；胃黏膜损伤；保护因子；热休克蛋白70；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.08.021
中图分类号：R245 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）08-0080-03
艾灸是一种温热刺激原，具有保护机体胃黏膜的功效。前期研究表明，艾灸对于引起胃黏膜损伤的多种复杂因素有调节性[1-2]。本研究在脊髓横断的前提条件下，观察艾灸对大鼠胃黏膜组织白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、表皮生长因子（EGF）及热休克蛋白70（HSP70）表达的影响，探讨艾灸对胃黏膜的保护效应与脊髓的关系。
1 实验材料
1.1 动物
48只健康成年SD大鼠，鼠龄3～4月，体质量180～200 g，雌雄各半，许可证号SYXK（湘）2013-0005。饲养于湖南中医药大学动物中心实验室，温度23～26 ℃，湿度40%～60%，自由饮食饮水。
1.2 艾条和药物
温灸纯艾条，蕲春时珍本草科技有限公司，规格φ4 mm×100 mm。青霉素，华北制药股份有限公司，批号20141001；阿司匹林泡腾片，阿斯利康制药有限公司，批号20141202。
1.3 主要试剂与仪器
10%甲醛（国药集团化学试剂有限公司），ELISA检测试剂盒、HSP70免疫组化检测试剂盒（长沙维尔公司）。自制艾灸支架，隔热薄膜。
2 实验方法
2.1 分组、造模及干预
实验大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组，每组12只，雌雄分笼饲养7 d。采用无水乙醇和阿司匹林灌胃制作胃黏膜损伤模型，艾灸+脊髓横断组大鼠予以脊髓横断手术，其他组正常饲养。术后大鼠用绳子俯卧位捆绑在鼠板上，参照文献[3]腧穴定位“足三里”，剪毛，后贴上有孔隔热贴，再把艾条固定在专门制作的艾灸支架上，将点燃的艾条施灸大鼠双侧“足三里”，距离穴位约0.5 cm。每日2次（8：00，14：00），连续8 d。正常组和模型组大鼠予8 d假艾灸捆绑操作。
2.2 胃黏膜组织损伤指数测定
大鼠腹腔注射20%乌拉坦（0.6 mL/100 g）麻醉，将幽门及贲门部结扎处理，摘取全胃，冰0.9%氯化钠溶液冲洗，GUTH法计算大鼠胃黏膜损伤指数（UI）。损伤≤1 mm（包括斑点糜烂）计1分；1 mm<损伤≤2 mm计2分；2 mm<损伤≤3 mm计3分；3 mm<损伤≤4 mm计4分；损伤≥4 mm计5分；损伤宽度>2 mm者计分加倍。
2.3 胃黏膜组织相关因子测定
ELISA检测大鼠血清IL-1β、TNF-α和胃黏膜组织EGF含量，严格按照试剂盒说明进行操作；Western blot检测大鼠胃黏膜组织HSP70蛋白表达，应用Imag J对WB条带进行灰度分析，以β-actin作为内参对照，将目的蛋白灰度值除以β-actin灰度值校正误差，以相对灰度值表示。
3 统计学方法
采用SPSS23.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示。符合正态分布采用方差分析，方差齐用SNK法或LSD法，方差不齐用Dunnett's T3法或Tamhan's T2法；不符合正态分布的用K Independent Samples法比较多个独立样本。P<0.05表示差异有统计学意义。
4 结果
4.1 艾灸对模型大鼠胃黏膜组织损伤指数的影响
与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜组织UI明显升高（P<0.01）；与模型组比较，艾灸模型组大鼠胃黏膜组织UI明显降低（P<0.01）；与艾灸模型组比较，艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织UI明显升高（P<0.01）。结果见表1。
4.2 艾灸对模型大鼠胃黏膜组织表皮生长因子和血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α含量的影响
与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜组织EGF和血清IL-1β、TNF-α含量明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，艾灸模型组大鼠胃黏膜组织EGF含量明显升高（P<0.01），大鼠血清IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.05，P<0.01）；与艾灸模型组比较，艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织EGF含量明显降低（P<0.01），大鼠血清IL-1β、TNF-α水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结果见表2。
4.3 艾灸对模型大鼠胃黏膜组织热休克蛋白70蛋白表达的影响
与模型组比较，艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织HSP70蛋白表达明显增加（P<0.01），艾灸+脊髓横断组HSP70蛋白表达较艾灸模型组降低（P<0.05）。结果见表3、图1。
5 讨论
艾灸具有行气止痛、通经活络、温经散寒等功效。足三里是脏腑中胃的下合穴，又是经络中足阳明胃经的合穴，故在针灸治疗胃肠道疾病方面，足三里常常被用作首要穴位。有研究显示，电针家兔足阳明胃经上的穴位进行治疗发现，该经脉上的穴位均会对家兔胃黏膜产生不同的保护效应，而在这些穴位中，“足三里”对胃黏膜的保护效应最佳[4]。在机体胃黏膜受到损伤及修复过程中，机体进行自我保护机制最重要的是内源性保护机制，该机制的本质是机体适应性反应引发机体内源性保护物质的出现，多种生长因子和细胞因子参与了胃黏膜上皮损伤修复的调节。
EGF是一种内源性因子，能抑制胃酸、胃蛋白酶分泌，防止溃疡的形成，具有促胃黏膜上皮细胞迁移和增殖的作用[5-6]，故EGF在修复机体受损伤的胃黏膜方面发挥着至关重要的作用。在本实验中，艾灸模型组和艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织EGF含量较模型组均有不同程度的上升，而艾灸+脊髓横断组大鼠胃黏膜组织EGF含量较艾灸模型组降低，表明艾灸上调胃黏膜组织EGF含量的作用受到脊髓横断术的影响。
IL-1β具有促进机体的炎性细胞因子表达，并能促进机体中性粒细胞浸润的作用。TNF-α也是一种炎性介质，可引起机体产生炎症反应。本实验结果表明，艾灸作用于胃黏膜受到损伤的大鼠能降低大鼠血清炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的含量，通过减轻炎症反应达到保护大鼠胃黏膜的作用。而大鼠脊髓遭到横断后，艾灸作用于大鼠反而会上升大鼠血清IL-1β和TNF-α的含量。表明艾灸大鼠“足三里”通过细胞因子来保护胃黏膜的这一作用有脊髓的参与。
HSP70是胃黏膜保护中一类重要蛋白，具有细胞蛋白自稳、协同免疫、抗细胞凋亡、抗氧化等作用。研究发现，艾灸能够保护应激性胃黏膜受损伤大鼠的胃黏膜，这一保护过程可能与艾灸诱导大鼠胃黏膜组织HSP70表达有关[7]。HSP70在长时间乙醇和阿司匹林刺激胃黏膜后以及高热后的表达明显增加，能够产生机体适应性的细胞保护作用[8-9]。
本实验将大鼠脊髓横断观察艾灸大鼠“足三里”对胃黏膜受损大鼠的抑制作用及对大鼠胃黏膜修复的保护作用。结果表明，艾灸大鼠“足三里”对大鼠胃黏膜损伤具有明显的保护作用，而脊髓横断术对其保护作用产生干扰。表明脊髓是艾灸对大鼠胃黏膜相关因子及HSP70表达进行调节的重要途径，脊髓是艾灸“足三里”对胃黏膜保护效应信号通路的一部分，起到重要的信号汇聚与整合的作用。
参考文献：
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