肾脏疾病中医证候动物模型的研究进展.pdf

耿亚++马月香

摘要：冠心病（coronary artery heart disease，CHD）是心血管疾病常见病种。CHD动物模型是现代医学研究疾病发展转归及评价药物作用疗效必不可少的工具，而针对于中医证候的动物模型是在中医基本思想的指导下在动物身上模拟出人类疾病的某些特征，制备出与人类疾病症状和病理变化相似或相同的动物模型。目前，建立CHD中医证候动物模型的方法多种多样，本文从痰瘀互结、心脾阳虚、寒凝血瘀、痰浊血瘀、心气虚、气虚血瘀方面综述了这几类模型的研究进展，以期为冠心病的研究提供参考。

关键词：冠心病；中医证候；动物模型；综述

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.08.035

中图分类号：R259.414 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）08-0129-04

冠心病（coronary artery heart disease，CHD）是指冠状动脉粥样硬化使管腔狭窄或阻塞，或/和冠状动脉痉挛导致心肌缺血缺氧而引起的心脏病，又称缺血性心脏病（IHD）。根据CHD临床致病特点，可归属中医学“胸痹”“真心痛”等范畴。在CHD研究中，动物模型的建立是主要研究方法之一，近年许多研究者在冠心病中医证候动物模型研究中取得一定成效，但也存在诸多与中医基本思想不协调的问题。笔者通过检索中国知识资源总库2005-2015年文献，对有关CHD中医证候动物模型文献做一梳理，现总结如下。

1 痰瘀互结证小型猪模型

林氏等[1]以高脂饲料（每100 kg饲料含胆固醇2 kg，胆盐0.5 kg，猪油10 kg）每日每只900 g喂养

小型猪2周，并以介入法对冠状动脉血管内皮进行损伤，术后继续以高脂饲料每日每只900 g喂养8周。观察测量并分别记录小型猪高脂2、6、10周的体质指数、舌象、心电图，以及无创血流动力学参数，包括心输出量、每搏输出量、外周血管阻力、左心做功。

在实验动物中，因小型猪的生理解剖、血脂指标和人类非常相近[2]。生理生化方面，猪的血液学、血流动力学、血液生化指标方面已被证实与人类相似，而且品种纯正、体质量较小、生长缓慢，近年来，在中医证候动物模型研究中应用越来越突出[3-4]。有学者以《中药新药治疗冠心病心绞痛的临床研究指导原则》为参照，对小型猪冠心病模型痰瘀互结证候进行诊断与评分，制定了CHD痰瘀互结证小型猪模型的评分标准，对主症、兼症、舌象、脉象进行评分，根据评分标准判断CHD痰瘀互结证小型猪模型是否建立[1，5]。

动物实验意在模拟中医过食肥甘厚味而引起脾运失健，痰湿壅盛，进而导致血脉痹阻的痰瘀互结的中医证候，以高脂饮食和冠状动脉血管内皮损伤术复制出CHD痰瘀互结证动物模型。

2 心脾阳虚证大鼠模型

韦氏等[6]先适应性饲养大鼠1周，然后对大鼠施行肩胛骨间棕色脂肪组织（brown adipose tissue，BAT）切除，术后在19 ℃环境下以高脂饲料（83%基本饲料，15%三酰甘油，2%胆固醇）饲养21 d，第22日皮下多点注射垂体后叶素（10 U/kg），第29日对大鼠施以中药。观察测量并分别记录大鼠行为（活动度、摄食行为、毛发改变、体质量变化等）、肛温、体温、心电图、心肌单相动作电位，以及心率、动作电位时程、动作电位0相幅值、动作电位50%复极化时程、90%复极化时程。因心脾阳虚包括阳虚症状（畏寒喜温、形寒肢冷等）和脾虚症状（消瘦、乏力、纳少、便溏及腹泻、脘腹胀痛等）两大症状群，可在实验中根据大鼠模型组行为、心电图、心脏指数、肛温，以及体质量与对照组比较，对差异指标进行数理统计学分析[6]，依差异是否有统计学意义，评价CHD心脾阳虚证动物模型是否建立。在CHD中医证候中，单纯心阳虚证在临床上较少见，多为混合阳虚证，如心脾阳虚等[7]。中医认为，心脾阳虚多因饮食不节、寒邪伤阳等，致脾胃运化失健，遂聚湿生痰，上犯心胸，阻遏心阳。本实验通过BAT切除术、注射垂体后叶素、高脂饮食、寒冷刺激的方式，模拟“饮食不节，寒邪伤阳”，使CHD心脾阳虚大鼠动物模型在病因病机上更加符合心脾阳虚证型。

3 寒凝血瘀证大鼠模型

王氏等[8]先用20%乌拉坦5 mL/kg对大鼠腹腔注射进行麻醉，并将大鼠仰卧固定于鼠台，连接生理记录仪并记录大鼠标准Ⅱ导联心电图，然后经口对大鼠气管插管，连接动物呼吸机，解剖并分离出股静脉进行静脉置管，5 s恒速注射注入垂体后叶素（6 U/kg，浓度为2 U/mL），造模30 min后进行各项指标观测。观察测量并分别记录大鼠体温、体征（唇周、爪子、耳朵、尾巴的颜色，大便形态）、心电图、微静脉管径、红细胞流速、6-酮-前列腺素F1α、血浆血栓素B2。将模型组与正常组检测指标比较，根据差异是否具有统计学意义判断CHD寒凝血瘀证大鼠模型是否建立。

中医认为，寒主收引，可抑遏阳气，使血行瘀滞。《素问·调经论篇》曰：“厥气上逆，寒气积于胸中而不泻，不泻则温气去，寒独留，则血凝泣，凝则脉不通。”研究表明，造模大剂量注射垂体后叶素具有寒邪致病特点，提示大鼠因寒邪内侵而复制出的动物模型为寒凝血瘀动物模型[9]。

4 痰浊血瘀证兔模型

张氏等[10]首先对雄性家兔以高脂饲料（胆固醇1%、蛋黄粉15%、猪油15%、基础饲料79%）饲养35 d，第36日采取冠状动脉结扎术，以30 mg/kg戊巴比妥腹腔注射，剪毛，常规消毒，开胸，对冠状动脉左前降支完全结扎，心电图监测。观察测量并分别记录实验前后全血黏度高切变率、全血黏度低切变率、血浆黏度、纤维蛋白原、血清白细胞介素-6。将模型组与正常组检测指标比较，根据差异是否具有统计学意义判断CHD痰浊血瘀证兔模型是否建立。中医认为，过食肥甘厚味可使脾运失健，津液不布，遂聚为痰，痰上扰心胸，致心脉痹阻。本实验中对家兔冠状动脉左前降支完全结扎及高脂喂养，旨在模拟痰阻心胸，血行失畅，脉络不利，心脉痹阻，以复制出痰浊血瘀证动物模型。

5 心气虚证大鼠模型

唐氏等[11]使用近交系Wistar大鼠采取游泳法建模，大鼠静息状态下喂养精饲料5 g/100 g，在水温25～28 ℃条件下以强迫负重（大鼠自身质量5%）方式游泳至力竭（头没入水下10 s不上浮），进行2次，前后间隔10 min，第18日起在游泳基础上连续4 d灌服心得安溶液2.4 mg/100 g。观察测量并分别记录实验前后大鼠行为状态、精神状态、体征、左心室动力学指标、心脏功能。将模型组与正常组检测指标比较，根据数据差异是否具有统计学意义，判断CHD心气虚证大鼠模型是否建立。

心气虚证是心血管病系统中尤为常见的证型[12]，而且在动物模型的构建中很难建立无兼证的心气虚证模型[13]。《素问·刺志论篇》有“谷盛气盛，谷虚气虚”。 “气为血之帅，血为气之母”，“气能行血”，血的正常运行有赖于气的推动及谷气的充盈，而心脏的正常搏动在于气血的正常运行。本实验在饮食方面只给予大鼠每日基础需要量，并增加其消耗量，意在模拟“谷虚气虚”“劳则气虚”；心得安溶液具有抑制心肌细胞钙离子和钠离子内流的作用，也是非选择性β受体阻断剂，大剂量或长期使用可引起心肌缺氧等，实验中在大鼠力竭运动后灌服心得安溶液，加重心气耗损，以复制出CHD心气虚证动物模型。

6 气虚血瘀证小型猪模型

在CHD中医证候中，气虚和血瘀证候最为常见[14-16]。该模型首先对小型猪进行麻醉，无菌条件下肋间开胸，于左回旋支冠状动脉放置Ameroid收缩环，缝合，建立慢性心肌缺血模型[17]。郭氏等[18]在此基础上观察并采集术前正常状态及术后4周的四诊信息、心电图、冠状动脉造影、颈部前腔静脉血5 mL、超声心动图，并以此评价小型猪血瘀证模型的建立情况。经过观察，该模型4～8周由血瘀证向气虚血瘀证证型转变，在8～12周该模型表现为气虚血瘀证[18-19]。

首先建立慢性心肌缺血小型猪模型，在造模第4周对小型猪进行冠状动脉造影、毒理学、微球流量、病理组织学、磁共振扫描检查，以检查结果评价是否建立心肌缺血模型[17]；然后参照血瘀证诊断标准[20]进行诊断，通过对比模型组与正常组的四诊信息、冠状动脉造影、心电图、血液流变学等指标进行评价[18]，通过数理统计分析差异是否具有统计学意义，判断血瘀证模型是否建立；8～12周详细记录小型猪动态，采集详细四诊信息，借助心脏超声、冠状动脉造影，根据血瘀证诊断标准[20]、中医虚证辨证参考标准[21]及中兽医临床诊断经验[22]进行评价，根据统计分析差异是否具有统计学意义判断CHD气虚血瘀证小型猪模型是否建立。

《难经·二十二难》曰：“气主煦之，血主濡之。”中医学有“气为血之帅，血为气之母”与“因实致虚”的理论，气能生血、行血、摄血，血能养气、载气。本实验首先采用结扎左回旋支冠状动脉复制出血瘀证型，然后因脉络瘀阻，血行凝滞，瘀血不去，新血不生，留瘀日久，遂心气痹阻，以致心气虚损，意在中医因实致虚理论指导下复制出CHD气虚血瘀证动物模型。此模型虽造模时间较长，但基本符合中医理论中病的发展传变规律，对临床实验研究具有指导意义。

7 小结与展望

《难经·六十难》说：“心之病，有厥痛，有真痛，何谓也……其五脏气相干，名厥心痛……其痛甚，但在心，手足青者，即名真心痛。”《金匮要略·胸痹心痛短气病脉证治》：“胸痹，心中痞气，气结在胸，胸满，胁下逆抢心。”其主要病机为心脉痹阻，临床主要表现为本虚标实，本虚责之气虚、气阴两虚及阳气虚，标实责之寒凝、气滞、痰浊、血瘀，且可相兼为病。CHD中医证候表现很多，在研究过程中需要根据不同要求建立不同的动物模型。

目前较为提倡病证结合动物模型，一般先建立疾病模型，再根据所需的中医证候施予干预因素，以获得病证结合模型[23]。而在中医临床诊疗中，“证”随“病”的发展转归不断变化，很难确定所建立的模型是否为所需要的动物模型。由于“证”是中医特色，与“病”紧密联系，因此，在建立中医证候动物模型过程中应同时考虑病证结合，使动物模型更加符合临床实际。这样才更符合临床需要，实验的准确性和稳定性也才能得到保障。

目前CHD中医证候动物模型建立尚存在一些问题：①动物与人及动物间的生理机能方面均存在差异，且性别不同、品系不同的实验动物对造模刺激因素的反应不同，相同的处理手段对不同种类、不同年龄的动物产生的生理影响也不尽相同。因此，在造模的动物选择上，应更注重选择与人体病理生理特点相近的动物，以增加实验在临床应用上的可靠性。②在中医证候动物的模型建立评价中，缺少符合中医特色的评价体系，应建立规范的冠心病中医证候动物模型的评价体系，使CHD中医证候动物模型的建立更加统一化、规范化、合理化、稳定化。③人和动物之间必然存在着差异，动物模型只是在一定程度上对人的病理现象进行模拟，不能完全对等，具体的CHD中医证候动物模型与临床实践存在一定差距，今后应当对CHD中医证候动物模型做进一步深入研究，使CHD中医证候动物模型更符合中医病因病机要求，接近人体生理病理特点，符合临床需要，为临床应用打好基础。

参考文献：

[1] 林成仁，任建勋，李磊，等.痰瘀同治方对冠心病痰瘀互结证小型猪模型中医证候评分的影响[J].中国中药杂志，2013，38（24）：4357-4361.

[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006：513.

[3] 赵欣，赵全明.动脉粥样硬化动物模型研究进展[J].医学研究杂志， 2010，39（10）：15-18.

[4] 张会永，庞琳琳，张哲，等.小型猪中医动物模型进展及在中医药研究中的应用[J].中华中医药学刊，2014，32（6）：1266-1269.

[5] 李欣志，马晓斌，李磊，等.小型猪冠心病模型痰瘀互结证候诊断与评分[J].中国中医基础医学杂志，2009，15（11）：825-827.

[6] 韦祎，唐汉庆，劳传君，等.冠心病心脾阳虚证大鼠模型的建立及中乌头碱对其心脏电生理的影响[J].时珍国医国药，2014，25（3）：759-761.

[7] 陈桦，唐汉庆，李晓华，等.冠心病心脾阳虚证动物模型的建立及附子理中汤的反证效果[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（23）：224-227.

[8] 王朋，杨明会，李绍旦，等.冠心病心绞痛寒凝血瘀证动物模型的建立[J].中国中医基础医学杂志，2014，20（3）：309-311.

[9] 张明雪.冠心病心阳虚证动物模型的制作[J].中国中医基础医学杂志，2002，8（4）：71-75.

[10] 张丽丽，李雁.加味温胆汤对实验性冠心病痰浊血瘀证家兔模型血清IL-6水平的影响[J].中国现代医生，2012，50（24）：1-2.

[11] 唐烨霞，程志清，姚立，等.大鼠心气虚模型制备方法[J].包头医学院学报，2009，25（1）：5-6.

[12] 屈松柏，张晓星，张道亮.心脏病人心阴虚心气虚证候特征探讨[J].湖北中医杂志，1995，17（11）：24-26.

[13] 中国中西医结合协会心血管协会.冠心病中医辨证标准[J].中西医结合杂志，1991，11（5）：257.

[14] 吴旸，金刚，崔杰，等.冠心病中医证候特点的回归分析[J].中医药学报，2008，36（4）：4-6.

[15] 贾振华，王永军，吴以岭，等.基于熵的复杂系统分划方法与冠心病心绞痛证候要素提取及其分布规律[J].第二军医大学学报，2007，28（7）：775-777.

[16] 衷敬柏，董绍英，王阶.2689例冠心病心绞痛证候要素的文献统计分析[J].中国中医药信息志，2006，13（5）：100-101.

[17] 于震，刘建勋.慢性心肌缺血动物模型制备方法[J].中国药理学通报，2005，21（3）：273-276.

[18] 郭淑贞，王伟，刘涛，等.小型猪冠心病（心肌缺血）血瘀证模型血液流变学及超声评价[J].中华中医药学刊，2007，25（4）：702-705.

[19] 王勇，李春，啜文静，等.基于小型猪冠心病慢性心肌缺血模型气虚血瘀证的证候评价[J].中国中西医结合杂志，2011，31（2）：233-237.

[20] 王阶，陈可冀，翁维良，等.血瘀证诊断标准的研究[J].中西医结合杂志，1988，8（10）：585-587.

[21] 沈自尹，王文健.中医虚证辨证参考标准[J].中西医结合杂志，1986， 6（10）：598.

[22] 张翔.论中兽医临床诊断的整体观[J].中兽医学杂志，2003（6）：32-33.

[23] 黄碧燕.关于病证结合动物模型研究现状的思考[J].中国中医药信息杂志，2010，17（1）：4-6.