益肾乌发口服液的质量标准探讨
穴卓+李玥瑛+张清波+张树杰
摘要：目的 建立爱维心口服液质量标准。方法 采用薄层色谱法对制剂中的丁香、西红花进行鉴别，采用气相色谱法测定丁香中丁香酚的含量。结果 丁香、西红花的薄层色谱特征斑点分离清晰，阴性对照无干扰。丁香酚在0.052 17～2.086 8 μg范围内线性关系良好（r=0.999 9），供试品溶液在24 h内稳定，平均加样回收率为95.7%，RSD=1.4%（n=6）。结论 本方法简单、准确可靠、重复性好，可用于控制爱维心口服液的质量。
关键词：爱维心口服液；丁香；西红花；丁香酚；薄层色谱法；气相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.025
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）11-0082-03
爱维心口服液收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》，由蚕茧、小豆蔻、牛舌草、丁香、薰衣草、香青兰、西红花、三条筋等15味药组成，具有强心、补血、通络、改善循环、醒脑等作用。现代研究显示，该药对冠心病、心肌缺血、心律不齐、失眠等有明显疗效[1-2]。维吾尔医学认为，冠心病多由异常黑胆质所致，爱维心口服液能调节气质、平衡体液、生津驱邪，主治由黑胆质引起的各种心血管疾病。原标准检验项目仅有性状、理化鉴别，为更好地控制产品质量，确保用药安全有效，本研究采用薄层色谱法对制剂中的丁香、西红花进行定性鉴别，采用气相色谱法（GC）测定丁香酚的含量。现报道如下。
1 仪器与试药
瓦里安3800气相色谱仪；HP-INNOWAX色谱柱 （30 m×0.25 mm，0.25 μm）；AE163电子天平，瑞士梅特勒公司；R.EPROSTAR3数码成像系统，瑞士卡玛公司；AS10200A超声波清洗器，天津奥特塞斯仪器有限公司。
丁香酚对照品（纯度99.2%，批号110725-201112）、丁香对照药材（批号1037-200002）、西红花对照药材（批号121009-200502）均由中国食品药品检定研究院提供。3批爱维心口服液由哈尔滨美君药业有限公司提供，批号分别为20130701、20130702、20130703，规格10 mL/支；各取处方量的1/10投料，按爱维心口服液工艺制备自制样。硅胶G板（手铺、青岛海洋化工厂）。试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 丁香 取本品20 mL，加乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺丁香的其他药材，按爱维心口服液制备工艺制成缺丁香的阴性样品，按供试品溶液制备方法，制成不含丁香的阴性对照溶液。取丁香对照药材0.5 g，加乙醚10 mL，超声处理10 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取丁香酚对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取上述4种溶液各5 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，其Rf值适宜，显色清晰，阴性对照无干扰，具较好专属性。
2.1.2 西红花 取本品50 mL蒸干，残渣加水10 mL使溶解，上D101大孔树脂柱（内径2.0 cm，柱长20 cm）以30%乙醇50 mL洗脱，弃去洗脱液，再用70%乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺西红花的其他药材，按爱维心口服液制备工艺制成缺西红花的阴性样品，按供试品溶液制备方法，制成不含西红花的阴性对照溶液。另取西红花对照药材20 mg，加甲醇5 mL，超声处理10 min，放置使澄清，取上清液作为对照药材溶液。再取西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验。吸取上述5种溶液各10 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，具较好专属性。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件 聚乙二醇20000（PEG-20M）为固定相的毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 ?m）；柱温为程序升温：初始温度150 ℃，保持30 min，以20 ℃/min升温至200 ℃，保持6 min；分流比20∶1；柱流速：2.0 mL/min；进样量：对照品溶液1.0 ?L，供试品溶液2.0 ?L；氢火焰离子化检测器（FID）[1-3]。理论板数按丁香酚峰计算应不低于8000。
2.2.2 溶液的制备
2.2.2.1 对照品溶液的制备 取丁香酚对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1 mL含丁香酚0.5 mg的溶液，即得。
2.2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品50 mL，用乙酸乙酯振摇提取5次（10、10、10、5、5 mL），合并乙酸乙酯层，于铺有3 g无水硫酸钠的脱脂棉上脱水后，用适量乙酸乙酯洗涤容器，合并乙酸乙酯液，置50 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2.3 阴性对照溶液的制备 取处方中缺丁香的1/10药材量，混匀，按制备工艺制成丁香阴性溶液，再按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。
2.2.3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各1.0 ?L，注入气相色谱仪并测定。结果供试品色谱峰与对照品色谱峰保留时间一致，并且对照品与其他组分达到较好分离，阴性对照溶液未出现对照品色谱峰，不干扰含量测定。色谱图见图1。
2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取丁香酚对照品溶液（0.521 7 mg/mL）0.1、0.3、0.5、1、1.5、2、3、4 ?L，注入液相色谱仪，测定峰面积，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=334414.771 1X-6001.062 78，r=0.999 967，表明丁香酚在进样量0.052 17～2.086 8 ?g之间有良好的线性关系。
2.2.5 精密度试验 精密称取丁香酚对照品适量，制备对照品溶液（0.521 7 mg/mL），连续进样5次，每次1 ?L，测定峰面积，计算，结果丁香酚RSD=0.3%，表明精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 取样品（批号20130701），按“2.2.2.2”项下方法制备，置于室温下，分别于0、3、6、9、12、15、18、21、24 h测定峰面积，结果丁香酚RSD=1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.2.7 重复性试验 取同一批样品（批号20130701），按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，精密吸取各2 ?L，分别进样测定，结果丁香酚RSD=1.3%，表明重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密量取丁香酚对照品溶液（6.217 4 mg/mL）1.0 mL，分别置于6个容器中，使干，各精密量取本品（批号20130701）25 mL，置于以上6个容器中，按“2.2.2.2”项下方法制备，进样测定并计算回收率。结果丁香酚平均回收率为95.7%，RSD=1.4%，见表1。
2.2.9 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备，测定丁香酚的含量，每批测3次，结果见表2。
3 讨论
丁香的薄层色谱鉴别[3-5]曾考察以去氢二异丁香酚[6]为对照对照品，结果阴性对照有干扰。西红花薄层色谱鉴别[3]中的供试品处理方法考察了直接蒸干、乙醚提取弃乙醚层、大孔树脂分离等，结果显示大孔树脂提取分离效果较好；对展开剂[7-8]的考察结果表明，乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）分离效果好，斑点清晰。
含量测定的供试品溶液制备考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂，结果样品用甲醇和乙醇溶解后色谱图杂峰多，分离效果不好，而用乙酸乙酯提取分离效果好。对样品提取次数进行了考察，用乙酸乙酯提取5次，每次10 mL，分取每次的乙酸乙酯层进行气相分析，结果表明提取5次能将样品中的丁香酚提取完全。
试验对气相色谱条件进行了考察，结果表明采用文中所述程序升温时被测成分峰分离效果最佳。
参考文献：
[1] 海拉提·玉山，吾甫尔江·吾布力.维吾尔医药爱维心口服液治疗冠心病的临床研究[J].中国中医药咨讯，2010，30（2）：214.
[2] 王蕊，王鹿，刘漪.维药爱维心口服液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].新疆医科大学学报，2009，32（2）：146-149.
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[5] 奥·乌力吉，白明刚，乌日吉木斯，等.清咽利喉胶囊的质量标准研究[J].中成药，2012，34（11）：2141-2146.
[6] 王航宇，王书云，李国玉，等.高效液相色谱法测定肉豆蔻衣中去氢二异丁香酚含量[J].医药导报，2013，32（5）：647-649.
[7] 王青虎，梁健存，武晓兰，等.薄层扫描法测定西红花十六味丸的质量标准研究[J].中成药，2006，28（11）：1694-1696.
[8] 徐立民.薄层色谱法鉴别红花与复方中的西红花[J].首都医药，2000， 7（7）：498.
（收稿日期：2014-02-27；编辑：陈静）
2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取丁香酚对照品溶液（0.521 7 mg/mL）0.1、0.3、0.5、1、1.5、2、3、4 ?L，注入液相色谱仪，测定峰面积，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=334414.771 1X-6001.062 78，r=0.999 967，表明丁香酚在进样量0.052 17～2.086 8 ?g之间有良好的线性关系。
2.2.5 精密度试验 精密称取丁香酚对照品适量，制备对照品溶液（0.521 7 mg/mL），连续进样5次，每次1 ?L，测定峰面积，计算，结果丁香酚RSD=0.3%，表明精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 取样品（批号20130701），按“2.2.2.2”项下方法制备，置于室温下，分别于0、3、6、9、12、15、18、21、24 h测定峰面积，结果丁香酚RSD=1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.2.7 重复性试验 取同一批样品（批号20130701），按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，精密吸取各2 ?L，分别进样测定，结果丁香酚RSD=1.3%，表明重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密量取丁香酚对照品溶液（6.217 4 mg/mL）1.0 mL，分别置于6个容器中，使干，各精密量取本品（批号20130701）25 mL，置于以上6个容器中，按“2.2.2.2”项下方法制备，进样测定并计算回收率。结果丁香酚平均回收率为95.7%，RSD=1.4%，见表1。
2.2.9 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备，测定丁香酚的含量，每批测3次，结果见表2。
3 讨论
丁香的薄层色谱鉴别[3-5]曾考察以去氢二异丁香酚[6]为对照对照品，结果阴性对照有干扰。西红花薄层色谱鉴别[3]中的供试品处理方法考察了直接蒸干、乙醚提取弃乙醚层、大孔树脂分离等，结果显示大孔树脂提取分离效果较好；对展开剂[7-8]的考察结果表明，乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）分离效果好，斑点清晰。
含量测定的供试品溶液制备考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂，结果样品用甲醇和乙醇溶解后色谱图杂峰多，分离效果不好，而用乙酸乙酯提取分离效果好。对样品提取次数进行了考察，用乙酸乙酯提取5次，每次10 mL，分取每次的乙酸乙酯层进行气相分析，结果表明提取5次能将样品中的丁香酚提取完全。
试验对气相色谱条件进行了考察，结果表明采用文中所述程序升温时被测成分峰分离效果最佳。
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[8] 徐立民.薄层色谱法鉴别红花与复方中的西红花[J].首都医药，2000， 7（7）：498.
（收稿日期：2014-02-27；编辑：陈静）
2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取丁香酚对照品溶液（0.521 7 mg/mL）0.1、0.3、0.5、1、1.5、2、3、4 ?L，注入液相色谱仪，测定峰面积，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=334414.771 1X-6001.062 78，r=0.999 967，表明丁香酚在进样量0.052 17～2.086 8 ?g之间有良好的线性关系。
2.2.5 精密度试验 精密称取丁香酚对照品适量，制备对照品溶液（0.521 7 mg/mL），连续进样5次，每次1 ?L，测定峰面积，计算，结果丁香酚RSD=0.3%，表明精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 取样品（批号20130701），按“2.2.2.2”项下方法制备，置于室温下，分别于0、3、6、9、12、15、18、21、24 h测定峰面积，结果丁香酚RSD=1.3%，表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.2.7 重复性试验 取同一批样品（批号20130701），按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，精密吸取各2 ?L，分别进样测定，结果丁香酚RSD=1.3%，表明重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密量取丁香酚对照品溶液（6.217 4 mg/mL）1.0 mL，分别置于6个容器中，使干，各精密量取本品（批号20130701）25 mL，置于以上6个容器中，按“2.2.2.2”项下方法制备，进样测定并计算回收率。结果丁香酚平均回收率为95.7%，RSD=1.4%，见表1。
2.2.9 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备，测定丁香酚的含量，每批测3次，结果见表2。
3 讨论
丁香的薄层色谱鉴别[3-5]曾考察以去氢二异丁香酚[6]为对照对照品，结果阴性对照有干扰。西红花薄层色谱鉴别[3]中的供试品处理方法考察了直接蒸干、乙醚提取弃乙醚层、大孔树脂分离等，结果显示大孔树脂提取分离效果较好；对展开剂[7-8]的考察结果表明，乙酸乙酯-甲醇-水（4∶1∶1）分离效果好，斑点清晰。
含量测定的供试品溶液制备考察了甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶剂，结果样品用甲醇和乙醇溶解后色谱图杂峰多，分离效果不好，而用乙酸乙酯提取分离效果好。对样品提取次数进行了考察，用乙酸乙酯提取5次，每次10 mL，分取每次的乙酸乙酯层进行气相分析，结果表明提取5次能将样品中的丁香酚提取完全。
试验对气相色谱条件进行了考察，结果表明采用文中所述程序升温时被测成分峰分离效果最佳。
参考文献：
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[7] 王青虎，梁健存，武晓兰，等.薄层扫描法测定西红花十六味丸的质量标准研究[J].中成药，2006，28（11）：1694-1696.
[8] 徐立民.薄层色谱法鉴别红花与复方中的西红花[J].首都医药，2000， 7（7）：498.
（收稿日期：2014-02-27；编辑：陈静）
