...素改善老年认知障碍大鼠学习记忆能力的机制研究.pdf
吴力群+魏丽娜+尹英敏+陈海鹏
摘要：目的 探讨养血祛风方对大鼠空间学习记忆能力的改善作用。方法 采用亚氨基二丙腈腹腔注射制造抽动障碍大鼠模型，将造模成功的大鼠随机分为模型组、西药组及中药低、中、高剂量组，各给药组给予相应药物灌胃，正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃，连续8周。造模后第1、4、8周分别进行旷场分析及水迷宫实验，评价各组大鼠空间学习记忆能力。结果 与正常组比较，模型组跨格次数增加，垂直活动次数明显减少；与模型组比较，各给药组垂直活动次数增加；第4、8周中药中、高剂量组模型大鼠逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）。结论 养血祛风方中、高剂量有改善慢性抽动障碍大鼠学习记忆能力的作用。
关键词：养血祛风方；抽动障碍；学习记忆能力；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.022
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）11-0072-03
抽动障碍（tic disorder，TD）是一种起病于儿童时期的神经精神疾病，以不自主的、反复的肌群运动型抽动，伴或不伴发声性抽动为主要特征，临床分为短暂性抽动障碍、慢性抽动障碍和多发性抽动症3个亚型。国际大样本流行病学调查估计全球TD患病率约1.0%[1]。TD半数以上伴有一种或以上心理行为障碍，轻者仅表现为躁动不安、过度敏感、易激惹或行为退缩等，重者表现为注意缺陷多动障碍、学习困难、强迫障碍、情绪障碍、自伤行为，以及品行障碍等心理行为障碍，也称为共患病。前期我们用神经毒素亚氨基二丙腈（IDPN）成功诱导出小鼠慢性抽动模型，且养血祛风方能改善慢性抽动障碍小鼠的点头行为，降低纹状体内多巴胺含量[2]。在此基础上，本实验进一步探讨养血祛风方改善TD空间学习记忆能力的作用。
1 材料与方法
1.1 动物
3周龄、雄性SD大鼠52只，清洁级，体质量（60±5）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）2006-2009。
1.2 药物与制备
养血祛风方（生地黄12 g，白芍12 g，当归10 g，川芎6 g，全蝎5 g，蜈蚣2 g）高、中、低剂量组分别按5.875、3.917、1.958 g原药材/mL制备成中药浸膏，分别相当于儿童临床用药的15、10、5倍。饮片均由北京中医药大学东方医院药剂科提供，中药浸膏制备由制剂室完成，冰箱冷藏备用。盐酸硫必利片，江苏天士力帝益药业有限公司生产，批号20130211，规格：100 mg/片。以生理盐水按20 mL/kg配成混悬液灌胃给药，相当于儿童临床用药的10倍，置于4 ℃冰箱中密闭保存，备用。
1.3 主要试剂与仪器
IDPN（Sigma公司）。旷场分析箱：采用100 cm×100 cm×50 cm木箱，将箱底划分为25个方格（20 cm×20 cm），四周内壁及箱底均为白色，北京中医药大学东方医院实验中心提供；MORRIS MDS-2水迷宫，中国医学科学院药物研究所研制。
1.4 造模
大鼠适应性喂养1周后，根据体质量随机分出8只大鼠作为正常组，余44只大鼠采用IDPN诱导TD，造模参照文献[2-3]方法加以改进，腹腔注射IDPN 200 mg/（kg·d），浓度15 mg/mL，每日1次，连续7 d。腹腔注射IDPN 7 d后，模型大鼠均表现出不同程度的活动增多，出现嗅、舔、洗脸、头颈部的上下运动及侧摆运动、旋转运动等异常行为，受刺激后异常活动愈加明显，但无发声现象。
1.5 分组
造模后第1、4、8周采用刻板运动评分进行行为学评价[4]。0分：无刻板运动；1分：躯体旋转行为；2分：头和颈部的上下运动过多；3分：头向侧摆合并头和颈部的上下运动过多。剔除0～1分的4只大鼠，将造模成功大鼠采用随机数字表法分为模型组、西药组和中药低、中、高剂量组，每组8只。
1.6 给药
中药高、中、低剂量组分别给予5.875、3.917、1.958 g原药材/mL养血祛风方浸膏灌胃给药，西药组给予盐酸硫必利25 mg/（kg·d）灌胃给药，给药容积为20 mL/（kg·d）；正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃。每日1次，连续 56 d。
1.7 空间学习记忆能力评价
1.7.1 旷场分析 将大鼠放入实验木箱箱底正中一格，观察5 min内自主活动。每只大鼠单独测试，每次测试前保持木箱内干净，于造模第1、4、8周观察水平跨格次数（指三爪以上跨入邻格的次数）、垂直活动次数（指两前肢离地10 cm以上的次数）。
1.7.2 水迷宫实验 每日让大鼠从泳池的不同象限入水训练2次，若120 s内未找到平台，将其拿到平台上停留10 s，若120 s内找到平台，也让其在平台上面停留10 s。训练4 d后开始记录大鼠从入水到找到平台所用的时间，共记录4 d。实验前1 d大鼠在水池内自由游泳2 min以熟悉环境，后3 d每只大鼠随机从4个象限的中点面壁式入水各1次，共4次，记录大鼠从入水到爬上水下平台的时间，即逃避潜伏期。如大鼠60 s仍未找到平台，由操作者将大鼠引上平台休息60 s，并将潜伏期记录为60 s。
1.8 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据用—x±s表示，两组比较，不满足正态分布用非参数检验；多组比较，满足正态分布且方差齐用方差分析，不满足正态分布或方差不齐用H检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 各组大鼠行为学评价
与正常组比较，其余各组大鼠刻板运动评分明显增加（P<0.01），见表1。
2.2 养血祛风方对大鼠空间认知能力的影响
与正常组比较，模型组水平跨格次数增多，垂直活动次数明显减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，各给药组垂直活动次数增多（P<0.05），但各给药组间比较差异无统计学意义。结果见表2。
2.3 养血祛风方对大鼠学习记忆能力的影响
造模组逃避潜伏期较正常组明显延长（P<0.05），提示造模成功。第4、8周中药高、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05），见表3。
3 讨论
TD属中医学“慢惊风”、“瘛疭”，“抽搐”和“肝风证”等范畴。《景岳全书·痉证》曰：“痉之为病，强直反张病也。其病在筋脉，筋脉拘急，所以反张；其病在血液，血液枯燥，所以筋挛。”慢性TD的病程均在1年以上，呈反复发作，久病气血亏虚，肝血不足，阴不制阳，血不养筋，以致肝风内动，出现抽动。肝主疏泄而藏血，其气升发，喜条达而恶抑郁，肝的疏泄功能正常，则气机调畅，气血和调，精神舒畅。气血亏虚，血不养肝，肝失条达，出现认知障碍，故肝血亏虚为TD伴发认知障碍的主要病机。
我们运用养血祛风法，方用四物汤合止痉散，从血论治小儿慢性TD和多发性抽动症，临床显示具有良好疗效[5]。四物汤养血调肝治其本，止痉散熄风止痉治其标，两方合用，共奏养血活血、熄风止痉之功效。
已有研究表明，TD儿童存在不同程度的神经心理缺陷，是影响社交、教育等功能的主要因素[6]，使TD治疗变得更复杂，成为临床治疗的难点。李氏等[7]研究表明，四物汤能提高血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。
本实验结果表明，模型大鼠跨格次数较正常组明增多，表明采用IDPN诱导的慢性抽动模型大鼠存在明显的中枢兴奋性增加。治疗4、8周后，中药各剂量组水平跨格次数减少，但与模型组比较差异无统计学意义；治疗8周后，西药组水平跨格次数较其他各组明显增多，分析其原因可能与硫必利长期用药导致的锥体外系反应有关。垂直活动次数则表现动物探知能力，本实验结果表明，模型大鼠垂直活动次数较正常组明显减少，说明慢性抽动模型大鼠存在空间认知能力的障碍，各给药组垂直活动次数均较模型组增加，但组间差异无统计学意义。中药中、高剂量治疗4、8周后，可缩短模型大鼠的逃避潜伏期，提示中药中、高剂量有改善慢性TD大鼠学习记忆能力的作用。
参考文献：
[1] Simpson HA， Jung L， Murphy TK. Update on attention-deficit/ hyperactivity disorder and tic disorders：a review of the current literature[J]. Curr Psychiatry Rep，2011，13（5）：351-356.
[2] Diamond BI， Reyes MG， Borison R. A new animal model for Tourette syndrome[J]. Advances in Neurology，1982，35：221-225.
[3] 戴志国，崔雅璠，霍婧伟，等.养血祛风法对慢性抽动障碍鼠行为改善和单胺类神经递质的影响[J].四川中医，2012，30（1）：22-24.
[4] 刘智胜.多发性抽动症的流行病学[J].中国实用儿科杂志，2002， 17（4）：195-196.
[5] 吴力群，徐正莉，王素梅，等.胡天成教授从血论治小儿多发性抽动症经验[J].四川中医，2010，28（1）：11-12.
[6] Snider L， Seligman L， Ketchen B， et al. Tics and problem behaviors in school children：prevalence， characterization and associations[J]. Pediatrics，2002，110：331-336.
[7] 李子清，喻凯，赵焕英，等.四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中AchE、SOD、GSH-Px活性的影响[J].中药药理与临床，2007，23（3）：4-6.
（收稿日期：2014-04-19；编辑：华强）
与正常组比较，模型组水平跨格次数增多，垂直活动次数明显减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，各给药组垂直活动次数增多（P<0.05），但各给药组间比较差异无统计学意义。结果见表2。
2.3 养血祛风方对大鼠学习记忆能力的影响
造模组逃避潜伏期较正常组明显延长（P<0.05），提示造模成功。第4、8周中药高、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05），见表3。
3 讨论
TD属中医学“慢惊风”、“瘛疭”，“抽搐”和“肝风证”等范畴。《景岳全书·痉证》曰：“痉之为病，强直反张病也。其病在筋脉，筋脉拘急，所以反张；其病在血液，血液枯燥，所以筋挛。”慢性TD的病程均在1年以上，呈反复发作，久病气血亏虚，肝血不足，阴不制阳，血不养筋，以致肝风内动，出现抽动。肝主疏泄而藏血，其气升发，喜条达而恶抑郁，肝的疏泄功能正常，则气机调畅，气血和调，精神舒畅。气血亏虚，血不养肝，肝失条达，出现认知障碍，故肝血亏虚为TD伴发认知障碍的主要病机。
我们运用养血祛风法，方用四物汤合止痉散，从血论治小儿慢性TD和多发性抽动症，临床显示具有良好疗效[5]。四物汤养血调肝治其本，止痉散熄风止痉治其标，两方合用，共奏养血活血、熄风止痉之功效。
已有研究表明，TD儿童存在不同程度的神经心理缺陷，是影响社交、教育等功能的主要因素[6]，使TD治疗变得更复杂，成为临床治疗的难点。李氏等[7]研究表明，四物汤能提高血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。
本实验结果表明，模型大鼠跨格次数较正常组明增多，表明采用IDPN诱导的慢性抽动模型大鼠存在明显的中枢兴奋性增加。治疗4、8周后，中药各剂量组水平跨格次数减少，但与模型组比较差异无统计学意义；治疗8周后，西药组水平跨格次数较其他各组明显增多，分析其原因可能与硫必利长期用药导致的锥体外系反应有关。垂直活动次数则表现动物探知能力，本实验结果表明，模型大鼠垂直活动次数较正常组明显减少，说明慢性抽动模型大鼠存在空间认知能力的障碍，各给药组垂直活动次数均较模型组增加，但组间差异无统计学意义。中药中、高剂量治疗4、8周后，可缩短模型大鼠的逃避潜伏期，提示中药中、高剂量有改善慢性TD大鼠学习记忆能力的作用。
参考文献：
[1] Simpson HA， Jung L， Murphy TK. Update on attention-deficit/ hyperactivity disorder and tic disorders：a review of the current literature[J]. Curr Psychiatry Rep，2011，13（5）：351-356.
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[6] Snider L， Seligman L， Ketchen B， et al. Tics and problem behaviors in school children：prevalence， characterization and associations[J]. Pediatrics，2002，110：331-336.
[7] 李子清，喻凯，赵焕英，等.四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中AchE、SOD、GSH-Px活性的影响[J].中药药理与临床，2007，23（3）：4-6.
（收稿日期：2014-04-19；编辑：华强）
与正常组比较，模型组水平跨格次数增多，垂直活动次数明显减少（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，各给药组垂直活动次数增多（P<0.05），但各给药组间比较差异无统计学意义。结果见表2。
2.3 养血祛风方对大鼠学习记忆能力的影响
造模组逃避潜伏期较正常组明显延长（P<0.05），提示造模成功。第4、8周中药高、中剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05），见表3。
3 讨论
TD属中医学“慢惊风”、“瘛疭”，“抽搐”和“肝风证”等范畴。《景岳全书·痉证》曰：“痉之为病，强直反张病也。其病在筋脉，筋脉拘急，所以反张；其病在血液，血液枯燥，所以筋挛。”慢性TD的病程均在1年以上，呈反复发作，久病气血亏虚，肝血不足，阴不制阳，血不养筋，以致肝风内动，出现抽动。肝主疏泄而藏血，其气升发，喜条达而恶抑郁，肝的疏泄功能正常，则气机调畅，气血和调，精神舒畅。气血亏虚，血不养肝，肝失条达，出现认知障碍，故肝血亏虚为TD伴发认知障碍的主要病机。
我们运用养血祛风法，方用四物汤合止痉散，从血论治小儿慢性TD和多发性抽动症，临床显示具有良好疗效[5]。四物汤养血调肝治其本，止痉散熄风止痉治其标，两方合用，共奏养血活血、熄风止痉之功效。
已有研究表明，TD儿童存在不同程度的神经心理缺陷，是影响社交、教育等功能的主要因素[6]，使TD治疗变得更复杂，成为临床治疗的难点。李氏等[7]研究表明，四物汤能提高血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。
本实验结果表明，模型大鼠跨格次数较正常组明增多，表明采用IDPN诱导的慢性抽动模型大鼠存在明显的中枢兴奋性增加。治疗4、8周后，中药各剂量组水平跨格次数减少，但与模型组比较差异无统计学意义；治疗8周后，西药组水平跨格次数较其他各组明显增多，分析其原因可能与硫必利长期用药导致的锥体外系反应有关。垂直活动次数则表现动物探知能力，本实验结果表明，模型大鼠垂直活动次数较正常组明显减少，说明慢性抽动模型大鼠存在空间认知能力的障碍，各给药组垂直活动次数均较模型组增加，但组间差异无统计学意义。中药中、高剂量治疗4、8周后，可缩短模型大鼠的逃避潜伏期，提示中药中、高剂量有改善慢性TD大鼠学习记忆能力的作用。
参考文献：
[1] Simpson HA， Jung L， Murphy TK. Update on attention-deficit/ hyperactivity disorder and tic disorders：a review of the current literature[J]. Curr Psychiatry Rep，2011，13（5）：351-356.
[2] Diamond BI， Reyes MG， Borison R. A new animal model for Tourette syndrome[J]. Advances in Neurology，1982，35：221-225.
[3] 戴志国，崔雅璠，霍婧伟，等.养血祛风法对慢性抽动障碍鼠行为改善和单胺类神经递质的影响[J].四川中医，2012，30（1）：22-24.
[4] 刘智胜.多发性抽动症的流行病学[J].中国实用儿科杂志，2002， 17（4）：195-196.
[5] 吴力群，徐正莉，王素梅，等.胡天成教授从血论治小儿多发性抽动症经验[J].四川中医，2010，28（1）：11-12.
[6] Snider L， Seligman L， Ketchen B， et al. Tics and problem behaviors in school children：prevalence， characterization and associations[J]. Pediatrics，2002，110：331-336.
[7] 李子清，喻凯，赵焕英，等.四物汤对血管性痴呆大鼠的认知功能及脑组织中AchE、SOD、GSH-Px活性的影响[J].中药药理与临床，2007，23（3）：4-6.
（收稿日期：2014-04-19；编辑：华强）
