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王迅+范玲+陆超+等
摘要：目的 建立同时测定补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷含量的一测多评分析方法，并验证此方法在该制剂中应用的准确性和可行性。方法 以红景天苷为内标物，采用外标法测定补心软脉颗粒中红景天苷的含量，建立其与马钱苷和虎杖苷的相对校正因子，通过该校正因子对马钱苷和虎杖苷进行含量计算，从而实现一测多评。同时采用常规的外标法测定补心软脉颗粒中这3种成分的含量，并将一测多评法的计算值与外标法的实测值进行比较。结果 10批补心软脉颗粒一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著差异，表明试验所得的相对校正因子具有很好的重现性和可信度。结论 一测多评法可用于补心软脉颗粒多指标质量评价研究。
关键词：补心软脉颗粒；一测多评；相对校正因子；红景天苷；马钱苷；虎杖苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.09.027
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）09-0093-05
补心软脉颗粒处方源于江苏省中医院心内科经验方，由红景天、山萸肉、虎杖等6味药组成，功效补益心肾、化瘀通络，用于治疗气阴两虚夹有瘀血的冠心病心绞痛。红景天苷是红景天有效成分之一，具有加快心肌收缩速度、增强心肌收缩力、降低平均动脉压作用[1]。环烯醚萜类是山萸肉主要有效成分[2]，其中以马钱苷活性较高，可增强心肌收缩性、提高心脏效率、扩张外周血管、增强心脏泵血功能。虎杖苷是虎杖主要有效成分之一，具有抑制心肌细胞收缩、抑制血小板聚集、抗脂质过氧化、抗休克等作用，还能减轻组织器官损伤[3]。故红景天苷、马钱苷和虎杖苷可作为补心软脉颗粒质量控制的指标成分。虎杖苷对照品不稳定、易分解[4]，马钱苷对照品价格较高，而红景天苷稳定又较易得到。因此，本研究以红景天苷为内标物，通过外标法测定其含量，建立该成分与马钱苷、虎杖苷的相对较正因子，并对方法的准确性和可行性进行探索和评价，实现该制剂多指标成分的同步监测。
1 仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱系统，DAD检测器；AgilentChem Station工作站；Waters2695-2998高效液相色谱系统，2998PAD检测器，Empower工作站（Waters公司）。色谱柱为Hedera C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）、Hypersil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Agilent C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）柱。BP-211D型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；超声波仪（SK6200H，上海科导超声仪器有限公司，功率250 W，频率53 kHz）。
对照品红景天苷（批号100826，含量>98%）、马钱苷（批号111127，含量>98%）、虎杖苷（批号110509）购自四川维克奇生物科技有限公司，样品由江苏省中医院制剂部制备，色谱甲醇，超纯水，其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 方法原理
在一定的线性范围内，成分的量（浓度或质量）与检测器响应成正比，即f=W/A（W表示成分的量，A表示响应值）[5]。在补心软脉颗粒的多指标质量评价时，以红景天苷为内标物，计算其与马钱苷和虎杖苷的相对校正因子，可通过相对校正因子计算马钱苷和虎杖苷的含量，从而实现一测多评。公式如下：
2.2 一测多评方法学考察
2.2.1 对照品溶液的制备 取红景天苷、马钱苷、虎杖苷对照品适量，精密称定，分别置25 mL容量瓶中，甲醇定容，配制成各对照品储备液。分别精密吸取红景天苷对照品储备液2 mL、马钱苷对照品储备液0.5 mL、虎杖苷对照品储备液0.5 mL，置于同一5 mL容量瓶中，甲醇定容，即得红景天苷145.12 μg/mL、马钱苷41.56 μg/mL、虎杖苷43.0 μg/mL的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取补心软脉颗粒约1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声30 min，取出，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 参照补心软脉颗粒制备工艺，分别制备缺红景天、山萸肉、虎杖的3个阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备，即得。
2.2.4 色谱条件 色谱柱：Hedera-C18柱（4.6 mm×
2.2.5 检测波长的选择 红景天苷、马钱苷、虎杖苷的全波长紫外吸收因为所使用的高效液相色谱仪配备DAD或PAD检测器，可以调用不同的波长。所以采用在目标成分各自的最大吸收波长下对其进行定量检测。
2.2.6 线性范围考察 精密吸取上述混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL进样分析，以进样量对峰面积积分值进行回归处理，得到3种成分的回归方程及线性范围。红景天苷：Y=376.17X-0.0276， r=0.999 5，线性范围为0.2902～2.902 4 μg；马钱苷：Y=1564X-4.369 3，r=0.999 9，线性范围为0.083 1～0.831 2 μg；虎杖苷：Y=3406.1X-2.9343， r=0.999 7，线性范围为0.086～0.860 0 μg。结果表明，各成分在各自范围内呈良好的线性关系。
2.2.7 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液5 μL，连续进样6次，记录红景天苷、马钱苷和虎杖苷的峰面积，计算，结果3种成分峰面积的RSD分别为1.21%、1.64%、1.97%，表明仪器精密度良好。
2.2.8 重复性试验 取同一批补心软脉颗粒（批号121215）约1.2 g，平行6份，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取供试品溶液5 μL，按“2.2.4”项下色谱条件测定，计算，结果红景天苷、马钱苷和虎杖苷平均含量为2.888、0.959、3.272 mg/g，RSD分别为2.32%、1.95%、2.53%，表明该方法重复性良好。
2.2.9 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5 μL，分别于配制后的0、4、8、12、24 h测定峰面积积分值，计算RSD，结果3种成分峰面积的RSD分别为1.64%、2.28%、2.75%，表明处理后的供试品溶液至少在24 h内稳定。
2.2.10 加样回收率试验 取同一批已知含量的补心软脉颗粒（批号121215）约0.6 g，共6 份，精密称定，分别按各成分在制剂中的含量（1∶1）分别精密加入对照品溶液（相当于红景天苷1.741 mg、马钱苷0.582 mg、虎杖苷1.935 mg），按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取上述供试品溶液5 μL，依法测定，计算各成分的加样回收率及RSD。结果表明，该方法的准确度良好。
2.3 相对校正因子的确定
精密吸取“2.2.1“项下混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL，采用Hedera C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），在Agilent 1260高效液相色谱仪上进样分析。根据相对校正因子计算公式，计算红景天苷对马钱苷、虎杖苷的相对校正因子及RSD。
2.4 相对校正因子重现性考察
2.4.1 不同仪器及不同色谱柱考察 精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL，进样分析。根据相对校正因子的计算公式，分别计算红景天苷对马钱苷、虎杖苷的相对校正因子及其RSD。试验分别考察了Waters 2695-2998、Agilent 1260高效液相色谱系统和Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Hypercil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），Kromasil C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）和Agilent C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）4种不同品牌和型号的色谱柱，所得相对校正因子及其RSD见表4，结果表明各成分相对校正因子重复性良好（RSD<5%）。
2.4.2 待测组分色谱峰的定位 分别计算各待测组分与内标物红景天苷的相对保留值和保留时间差2项参数作为色谱峰定位标准，结果表明相对保留值较保留时间差而言，波动较小。本试验考察了内标物红景天苷与马钱苷、虎杖苷的相对保留时间在不同品牌仪器和不同型号色谱柱上的重复性，见表5。结果显示RSD>5%，说明其在不同仪器和不同色谱柱上的重复性较差，在这种情况下，利用相对保留时间很难准确定位。本研究基于相同的成分光谱性质相同或相似，通过对所有不同的流出时间点的光谱与纯物质的光谱实行比对，且马钱苷和虎杖苷紫外吸收特征的差别也较大，再结合目标峰所在原色谱柱中的保留时间信息，对目标峰进行正确定位。
2.4.3 一测多评法与外标法结果比较 为了验证一测多评法的准确性和可行性，分别精密吸取10批补心软脉颗粒供试品溶液各5 μL注入高效液相色谱仪，测定。分别采用外标法和一测多评法计算补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷的含量，结果见表6。其含量间的RSD<5%，表明2种含量测定方法得到的含量值之间差异不大，建立的相对校正因子具有很好的重现性和可信度，一测多评法可用于补心软脉颗粒多指标质量评价研究。
3 讨论
中成药的质量标准大多是以单一指标进行质量控制，难以真正与中药的多效性和整体性相吻合。中药多靶点的作用特点要求以多指标对其进行质量控制。然而，现阶段供含量测定用的对照品供给不足或价格昂贵，给中成药的多指标质量评价带来许多困扰。一测多评这一中药质量评价模式，仅需要中药及其制剂中某一具有代表性的对照品（如本研究中的内标物红景天苷），利用它与该中药制剂中其他有效成分（马钱苷、虎杖苷）之间量的关系，即可计算出其他成分（马钱苷、虎杖苷）的含量，从而实现中成药的多指标（红景天苷、马钱苷、虎杖苷）的质量控制。一测多评法在湿疹软膏[6]、冠脉康胶囊[7]、新清宁片[8]、热痹消颗粒[9]等制剂的质量中得到发展和验证，该法在降低检测成本的同时，解决了对照品供给不足的问题，日渐成为中药及其制剂质量评价的新模式。
中药制剂成分非常复杂，因此对待测成分色谱峰的正确定位是一测多评法成功的关键。本研究利用相对保留时间进行定位，虽然结果显示RSD>5%，说明其在不同仪器和不同色谱柱上的重复性较差，在这种情况下，利用相对保留时间很难准确定位。由于马钱苷、虎杖苷相对于红景天苷的出峰顺序不变，且两者的紫外吸收特征差别较大，因此采用光谱法进行目标峰定位有其合理性。
一测多评法在实际应用中存在值得注意的方面：①应充分考察不同因素（不同实验室、不同型号的高效液相色谱仪、不同色谱柱以及流动相的组成比例、柱温、流速、检测波长等）对相对校正因子值的影响，对影响较大的因素进行限定，以保证其具有良好的重现性[10]。②应确保待测组分峰的正确定位。由于在实际应用中，只以内标物作为对照品，其他待测成分无对照品，因此，如何对目标成分的色谱峰进行准确定位是一测多评法能否成功的关键。罗氏等[11]研究表明，可以根据保留时间差、相对保留值和目标成分的紫外吸收光谱特征来定位，可以使用含有待测成分的中药对照提取物进行定位，还可以使用高效液相色谱-质谱进行分析，根据各种被测成分相应的保留时间、分子离子质荷比、紫外光谱数据对样品中被测成分进行确认。
虽然一测多评法在中药质量控制中的应用尚存在许多需要改进的地方，但其具有方便、快速、廉价的优势，而且通过成分间的相对校正因子同时测定中药中多个有效成分的含量，更适合中药多成分多靶点的特点，会越来越广泛地应用于中药科研和生产实践中，成为中药质量控制新的发展趋势。
参考文献：
[1] 莫书荣，鲁波，连芳.红景天对心脏血液动力学及心肌收缩力的影响[J].中国临床康复，2005，9（11）：204-206.
[2] 李芳丽，毕月玲.山茱萸的药理学研究进展[J].医学信息，2011，24（9）：5965-5967.
[3] 汪天明，王晓梅.虎杖苷药理作用研究的新进展[J].宿州学院学报， 2007，22（2）：114-116.
[4] 齐辉，张勉，王峥涛.HPLC同时测定虎杖中4种成分的含量[J].中国药学杂志，2006，31（23）：2003-2005.
[5] 李岑，杨红霞，肖远灿，等.一测多评法测定藏药当佐中没食子酸、羟基红花黄色素-A、桂皮醛及胡椒碱的含量[J].药物分析杂志，2011，31（9）：1658-1663.
[6] 魏凤环，吴桂欣，朱清利，等.一测多评法测定湿疹软膏中欧前胡素、异欧前胡素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（21）：125-128.
[7] 邹桂欣，尤献民，张颖，等.一测多评法在冠脉康胶囊多种成分检测中的应用研究[J].中国中药杂志，2008，33（15）：1828-1831.
[8] 张锴镔，冯伟红，王智民，等.一测多评法与外标法测定新清宁片中大黄蒽醌类成分含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（11）：61-65.
[9] 陈晓斌，周琴妹，刘顺，等.一测多评技术在热痹消颗粒质量评价中的应用[J].中国中医药信息杂志，2013，20（1）：60-63.
[10] 陆兔林，石上梅，蔡宝昌，等.基于一测多评的中药多成分定量研究进展[J].中草药，2012，43（12）：2525-2529.
[11] 罗祖良，仇峰，韦日伟，等.相对校正因子在中药多指标测定中的应用研究进展[J].中草药，2012，43（7）：1448-1452.
（收稿日期：2014-02-10；编辑：陈静）
2.2.9 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5 μL，分别于配制后的0、4、8、12、24 h测定峰面积积分值，计算RSD，结果3种成分峰面积的RSD分别为1.64%、2.28%、2.75%，表明处理后的供试品溶液至少在24 h内稳定。
2.2.10 加样回收率试验 取同一批已知含量的补心软脉颗粒（批号121215）约0.6 g，共6 份，精密称定，分别按各成分在制剂中的含量（1∶1）分别精密加入对照品溶液（相当于红景天苷1.741 mg、马钱苷0.582 mg、虎杖苷1.935 mg），按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取上述供试品溶液5 μL，依法测定，计算各成分的加样回收率及RSD。结果表明，该方法的准确度良好。
2.3 相对校正因子的确定
精密吸取“2.2.1“项下混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL，采用Hedera C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），在Agilent 1260高效液相色谱仪上进样分析。根据相对校正因子计算公式，计算红景天苷对马钱苷、虎杖苷的相对校正因子及RSD。
2.4 相对校正因子重现性考察
2.4.1 不同仪器及不同色谱柱考察 精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL，进样分析。根据相对校正因子的计算公式，分别计算红景天苷对马钱苷、虎杖苷的相对校正因子及其RSD。试验分别考察了Waters 2695-2998、Agilent 1260高效液相色谱系统和Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Hypercil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），Kromasil C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）和Agilent C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）4种不同品牌和型号的色谱柱，所得相对校正因子及其RSD见表4，结果表明各成分相对校正因子重复性良好（RSD<5%）。
2.4.2 待测组分色谱峰的定位 分别计算各待测组分与内标物红景天苷的相对保留值和保留时间差2项参数作为色谱峰定位标准，结果表明相对保留值较保留时间差而言，波动较小。本试验考察了内标物红景天苷与马钱苷、虎杖苷的相对保留时间在不同品牌仪器和不同型号色谱柱上的重复性，见表5。结果显示RSD>5%，说明其在不同仪器和不同色谱柱上的重复性较差，在这种情况下，利用相对保留时间很难准确定位。本研究基于相同的成分光谱性质相同或相似，通过对所有不同的流出时间点的光谱与纯物质的光谱实行比对，且马钱苷和虎杖苷紫外吸收特征的差别也较大，再结合目标峰所在原色谱柱中的保留时间信息，对目标峰进行正确定位。
2.4.3 一测多评法与外标法结果比较 为了验证一测多评法的准确性和可行性，分别精密吸取10批补心软脉颗粒供试品溶液各5 μL注入高效液相色谱仪，测定。分别采用外标法和一测多评法计算补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷的含量，结果见表6。其含量间的RSD<5%，表明2种含量测定方法得到的含量值之间差异不大，建立的相对校正因子具有很好的重现性和可信度，一测多评法可用于补心软脉颗粒多指标质量评价研究。
3 讨论
中成药的质量标准大多是以单一指标进行质量控制，难以真正与中药的多效性和整体性相吻合。中药多靶点的作用特点要求以多指标对其进行质量控制。然而，现阶段供含量测定用的对照品供给不足或价格昂贵，给中成药的多指标质量评价带来许多困扰。一测多评这一中药质量评价模式，仅需要中药及其制剂中某一具有代表性的对照品（如本研究中的内标物红景天苷），利用它与该中药制剂中其他有效成分（马钱苷、虎杖苷）之间量的关系，即可计算出其他成分（马钱苷、虎杖苷）的含量，从而实现中成药的多指标（红景天苷、马钱苷、虎杖苷）的质量控制。一测多评法在湿疹软膏[6]、冠脉康胶囊[7]、新清宁片[8]、热痹消颗粒[9]等制剂的质量中得到发展和验证，该法在降低检测成本的同时，解决了对照品供给不足的问题，日渐成为中药及其制剂质量评价的新模式。
中药制剂成分非常复杂，因此对待测成分色谱峰的正确定位是一测多评法成功的关键。本研究利用相对保留时间进行定位，虽然结果显示RSD>5%，说明其在不同仪器和不同色谱柱上的重复性较差，在这种情况下，利用相对保留时间很难准确定位。由于马钱苷、虎杖苷相对于红景天苷的出峰顺序不变，且两者的紫外吸收特征差别较大，因此采用光谱法进行目标峰定位有其合理性。
一测多评法在实际应用中存在值得注意的方面：①应充分考察不同因素（不同实验室、不同型号的高效液相色谱仪、不同色谱柱以及流动相的组成比例、柱温、流速、检测波长等）对相对校正因子值的影响，对影响较大的因素进行限定，以保证其具有良好的重现性[10]。②应确保待测组分峰的正确定位。由于在实际应用中，只以内标物作为对照品，其他待测成分无对照品，因此，如何对目标成分的色谱峰进行准确定位是一测多评法能否成功的关键。罗氏等[11]研究表明，可以根据保留时间差、相对保留值和目标成分的紫外吸收光谱特征来定位，可以使用含有待测成分的中药对照提取物进行定位，还可以使用高效液相色谱-质谱进行分析，根据各种被测成分相应的保留时间、分子离子质荷比、紫外光谱数据对样品中被测成分进行确认。
虽然一测多评法在中药质量控制中的应用尚存在许多需要改进的地方，但其具有方便、快速、廉价的优势，而且通过成分间的相对校正因子同时测定中药中多个有效成分的含量，更适合中药多成分多靶点的特点，会越来越广泛地应用于中药科研和生产实践中，成为中药质量控制新的发展趋势。
参考文献：
[1] 莫书荣，鲁波，连芳.红景天对心脏血液动力学及心肌收缩力的影响[J].中国临床康复，2005，9（11）：204-206.
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[4] 齐辉，张勉，王峥涛.HPLC同时测定虎杖中4种成分的含量[J].中国药学杂志，2006，31（23）：2003-2005.
[5] 李岑，杨红霞，肖远灿，等.一测多评法测定藏药当佐中没食子酸、羟基红花黄色素-A、桂皮醛及胡椒碱的含量[J].药物分析杂志，2011，31（9）：1658-1663.
[6] 魏凤环，吴桂欣，朱清利，等.一测多评法测定湿疹软膏中欧前胡素、异欧前胡素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（21）：125-128.
[7] 邹桂欣，尤献民，张颖，等.一测多评法在冠脉康胶囊多种成分检测中的应用研究[J].中国中药杂志，2008，33（15）：1828-1831.
[8] 张锴镔，冯伟红，王智民，等.一测多评法与外标法测定新清宁片中大黄蒽醌类成分含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（11）：61-65.
[9] 陈晓斌，周琴妹，刘顺，等.一测多评技术在热痹消颗粒质量评价中的应用[J].中国中医药信息杂志，2013，20（1）：60-63.
[10] 陆兔林，石上梅，蔡宝昌，等.基于一测多评的中药多成分定量研究进展[J].中草药，2012，43（12）：2525-2529.
[11] 罗祖良，仇峰，韦日伟，等.相对校正因子在中药多指标测定中的应用研究进展[J].中草药，2012，43（7）：1448-1452.
（收稿日期：2014-02-10；编辑：陈静）
2.2.9 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液5 μL，分别于配制后的0、4、8、12、24 h测定峰面积积分值，计算RSD，结果3种成分峰面积的RSD分别为1.64%、2.28%、2.75%，表明处理后的供试品溶液至少在24 h内稳定。
2.2.10 加样回收率试验 取同一批已知含量的补心软脉颗粒（批号121215）约0.6 g，共6 份，精密称定，分别按各成分在制剂中的含量（1∶1）分别精密加入对照品溶液（相当于红景天苷1.741 mg、马钱苷0.582 mg、虎杖苷1.935 mg），按“2.2.2”项下方法制备，精密吸取上述供试品溶液5 μL，依法测定，计算各成分的加样回收率及RSD。结果表明，该方法的准确度良好。
2.3 相对校正因子的确定
精密吸取“2.2.1“项下混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL，采用Hedera C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），在Agilent 1260高效液相色谱仪上进样分析。根据相对校正因子计算公式，计算红景天苷对马钱苷、虎杖苷的相对校正因子及RSD。
2.4 相对校正因子重现性考察
2.4.1 不同仪器及不同色谱柱考察 精密吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液2、3、5、8、10、12、20 μL，进样分析。根据相对校正因子的计算公式，分别计算红景天苷对马钱苷、虎杖苷的相对校正因子及其RSD。试验分别考察了Waters 2695-2998、Agilent 1260高效液相色谱系统和Hedera C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）、Hypercil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），Kromasil C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）和Agilent C18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）4种不同品牌和型号的色谱柱，所得相对校正因子及其RSD见表4，结果表明各成分相对校正因子重复性良好（RSD<5%）。
2.4.2 待测组分色谱峰的定位 分别计算各待测组分与内标物红景天苷的相对保留值和保留时间差2项参数作为色谱峰定位标准，结果表明相对保留值较保留时间差而言，波动较小。本试验考察了内标物红景天苷与马钱苷、虎杖苷的相对保留时间在不同品牌仪器和不同型号色谱柱上的重复性，见表5。结果显示RSD>5%，说明其在不同仪器和不同色谱柱上的重复性较差，在这种情况下，利用相对保留时间很难准确定位。本研究基于相同的成分光谱性质相同或相似，通过对所有不同的流出时间点的光谱与纯物质的光谱实行比对，且马钱苷和虎杖苷紫外吸收特征的差别也较大，再结合目标峰所在原色谱柱中的保留时间信息，对目标峰进行正确定位。
2.4.3 一测多评法与外标法结果比较 为了验证一测多评法的准确性和可行性，分别精密吸取10批补心软脉颗粒供试品溶液各5 μL注入高效液相色谱仪，测定。分别采用外标法和一测多评法计算补心软脉颗粒中红景天苷、马钱苷和虎杖苷的含量，结果见表6。其含量间的RSD<5%，表明2种含量测定方法得到的含量值之间差异不大，建立的相对校正因子具有很好的重现性和可信度，一测多评法可用于补心软脉颗粒多指标质量评价研究。
3 讨论
中成药的质量标准大多是以单一指标进行质量控制，难以真正与中药的多效性和整体性相吻合。中药多靶点的作用特点要求以多指标对其进行质量控制。然而，现阶段供含量测定用的对照品供给不足或价格昂贵，给中成药的多指标质量评价带来许多困扰。一测多评这一中药质量评价模式，仅需要中药及其制剂中某一具有代表性的对照品（如本研究中的内标物红景天苷），利用它与该中药制剂中其他有效成分（马钱苷、虎杖苷）之间量的关系，即可计算出其他成分（马钱苷、虎杖苷）的含量，从而实现中成药的多指标（红景天苷、马钱苷、虎杖苷）的质量控制。一测多评法在湿疹软膏[6]、冠脉康胶囊[7]、新清宁片[8]、热痹消颗粒[9]等制剂的质量中得到发展和验证，该法在降低检测成本的同时，解决了对照品供给不足的问题，日渐成为中药及其制剂质量评价的新模式。
中药制剂成分非常复杂，因此对待测成分色谱峰的正确定位是一测多评法成功的关键。本研究利用相对保留时间进行定位，虽然结果显示RSD>5%，说明其在不同仪器和不同色谱柱上的重复性较差，在这种情况下，利用相对保留时间很难准确定位。由于马钱苷、虎杖苷相对于红景天苷的出峰顺序不变，且两者的紫外吸收特征差别较大，因此采用光谱法进行目标峰定位有其合理性。
一测多评法在实际应用中存在值得注意的方面：①应充分考察不同因素（不同实验室、不同型号的高效液相色谱仪、不同色谱柱以及流动相的组成比例、柱温、流速、检测波长等）对相对校正因子值的影响，对影响较大的因素进行限定，以保证其具有良好的重现性[10]。②应确保待测组分峰的正确定位。由于在实际应用中，只以内标物作为对照品，其他待测成分无对照品，因此，如何对目标成分的色谱峰进行准确定位是一测多评法能否成功的关键。罗氏等[11]研究表明，可以根据保留时间差、相对保留值和目标成分的紫外吸收光谱特征来定位，可以使用含有待测成分的中药对照提取物进行定位，还可以使用高效液相色谱-质谱进行分析，根据各种被测成分相应的保留时间、分子离子质荷比、紫外光谱数据对样品中被测成分进行确认。
虽然一测多评法在中药质量控制中的应用尚存在许多需要改进的地方，但其具有方便、快速、廉价的优势，而且通过成分间的相对校正因子同时测定中药中多个有效成分的含量，更适合中药多成分多靶点的特点，会越来越广泛地应用于中药科研和生产实践中，成为中药质量控制新的发展趋势。
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（收稿日期：2014-02-10；编辑：陈静）
