RP HPLC测定藏木香中土木香内酯和异土木香内酯含量.pdf
张秀娟+丁永辉+倪琳+杨锡
摘要：目的 建立同时测定三味甘露散中土木香内酯、异土木香内酯含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，光电二极管阵列检测器，色谱柱为CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0 mL/min，检测波长225 nm，柱温30 ℃。结果 土木香内酯在0.083～0.517 μg、异土木香内酯在0.108～0.672 μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 9；土木香内酯平均加样回收率为97.95%，RSD=1.31%；异土木香内酯平均加样回收率为97.69%，RSD=1.24%。结论 本方法操作简便，可快速、准确地测定三味甘露散中土木香内酯和异土木香内酯的含量。
关键词：三味甘露散；高效液相色谱法；土木香内酯；异土木香内酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.026
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）11-0085-03
三味甘露散收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》（第一册），由藏木香、寒水石（水煮）、异叶青兰组成[1]。原标准仅有鉴别及常规检查项，为更有效地控制该药品质量，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对处方中君药藏木香的有效成分土木香内酯和异土木香内酯进行定量测定，现报道如下。
1 仪器与试药
C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），光电二极管阵列检测器；KQ-250B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；德国SartoriusR200D型分析天平（十万分之一）；上海梅特勒AE240型分析天平（万分之一）。
土木香内酯对照品（批号110760-201008）、异土木香内酯对照品（批号110761-200204）均购自中国食品药品检定研究院；三味甘露散样品（批号090401、110301）由西藏藏医学院藏药有限公司提供，阴性样品自制；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（58∶42）；检测波长：225 nm；柱温30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 ?L。
2.2 对照品溶液的制备
取土木香内酯对照品、异土木香内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液（土木香内酯0.020 68 mg/mL，异土木香内酯0.026 88 mg/mL），即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品约2 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例及制备工艺，配制不含藏木香的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 空白试验
分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，测定。色谱图见图1。
1.异土木香内酯；2.土木香内酯
2.6 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液4、6、8、15、20、25 ?L，注入液相色谱仪，测定含量。结果表明，土木香内酯在0.083～0.517 ?g、异土木香内酯在0.108～0.672 ?g范围内均呈良好线性关系。回归方程分别为：土木香内酯C=1.389 5×10-7A+2.447 2×10-3，r=0.999 9；异土木香内酯C=1.603 6×10-7A+4.106 1×10-3，r=0.999 9。
2.7 精密度试验
精密吸取土木香内酯、异土木香内酯混合对照品溶液10 ?L，注入高效液相色谱仪，分别进样6次，测定峰面积，RSD分别为0.35%、0.56%，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号090401）10 ?L，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，RSD=0.77%，表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。
2.9 重复性试验
取同一批样品（批号090401）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，测得土木香内酯平均含量为2.02 mg/g，RSD=1.38%，异土木香内酯平均含量为2.58 mg/g，RSD=1.68%，表明该方法重复性好。
2.10 加样回收率试验
取已知土木香内酯、异土木香内酯含量的供试品（批号110301）6份，每份约1 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分别精密加入一定量混合对照品溶液（土木香内酯0.182 8 mg/mL、异土木香内酯0.191 4 mg/mL），按“2.3”项下方法制备并测定，结果见表1。
2.11 样品含量测定
取2批样品，每批做2份平行样，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依次测定土木香内酯、异土木香内酯含量，结果见表2。
3 讨论
在供试品溶液制备过程中，加甲醇25 mL，分别考察超声处理10、30、40、60 min，所得样品测定结果表明，超声处理30 min提取效果最佳。
本试验采用HPLC对处方中君药藏木香的有效成分土木香内酯和异土木香内酯进行测定。气相色谱法（GC）也是一种分析速度快、分离效率高的分离分析方法，在食品及土壤中农药残留检测领域应用颇为广泛[2-3]，常用于测定中药挥发性成分[4]。有文献报道采用GC测定土木香内酯、异土木香内酯含量[5-10]。对该制剂我们也采用GC进行含量测定，以乙酸乙酯为溶剂超声提取，氢火焰离子化检测器检测，采用程序升温，测得土木香内酯平均含量为2.06 mg/g，异土木香内酯平均含量为2.55 mg/g，与HPLC测定结果比较，含量值较低。因此，采用HPLC测定该处方中土木香内酯、异土木香内酯的含量，具有操作简便、快速、结果准确等特点，可更有效地控制三味甘露散的质量。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：藏药（第一册）[S].1995：258.
[2] 徐芳，王建芬，魏丹丹，等.GC法在检测农药残留中的研究进展[J].广东农业科学，2010，37（12）：161-163.
[3] 陈卫明，邓天龙，张勤，等.土壤中有机氯农药残留的分析技术研究进展[J].岩矿测试，2009，28（2）：151-156.
[4] 刘峰，马久太，单娜，等.GC法同时测定冠心疏通胶囊中丁香酚、龙脑和异龙脑[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（18）：56-59.
[5] 陈晓红，陈睿，陈元涛，等.果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定[J].医学导报，2011，30（9）：1210-1212.
[6] 查松其其格，那松巴乙拉.GC法测定都日布勒吉乌日勒中土木香内酯和异土木香内酯的含量[J].中国民族医药杂志，2011，17（5）：59-62.
[7] 王燕，王芸，孙文基.气相色谱内标法同时测定土木香中土木香内酯、异土木香内酯的含量[J].武警医学院学报，2010，19（7）：527-529.
[8] 王燕，张雅惠，格桑索朗，等.毛细管气相色谱内标法同时测定藏木香中土木香内酯、异土木香内酯的含量[J].药物分析杂志，2009，29（12）：2058-2060.
[9] 童丽，热增才旦，李文渊.GC法测定藏药玛努巴扎中的土木香内酯[J].中国中药杂志，2008，33（14）：1761-1762.
[10] 李庆斌，黄英栋，唐丽丽.气相色谱法测定冠心苏合胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（15）：101-102.
（收稿日期：2013-05-28）
（修回日期：2014-04-08；编辑：陈静）
摘要：目的 建立同时测定三味甘露散中土木香内酯、异土木香内酯含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，光电二极管阵列检测器，色谱柱为CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0 mL/min，检测波长225 nm，柱温30 ℃。结果 土木香内酯在0.083～0.517 μg、异土木香内酯在0.108～0.672 μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 9；土木香内酯平均加样回收率为97.95%，RSD=1.31%；异土木香内酯平均加样回收率为97.69%，RSD=1.24%。结论 本方法操作简便，可快速、准确地测定三味甘露散中土木香内酯和异土木香内酯的含量。
关键词：三味甘露散；高效液相色谱法；土木香内酯；异土木香内酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.026
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）11-0085-03
三味甘露散收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》（第一册），由藏木香、寒水石（水煮）、异叶青兰组成[1]。原标准仅有鉴别及常规检查项，为更有效地控制该药品质量，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对处方中君药藏木香的有效成分土木香内酯和异土木香内酯进行定量测定，现报道如下。
1 仪器与试药
C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），光电二极管阵列检测器；KQ-250B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；德国SartoriusR200D型分析天平（十万分之一）；上海梅特勒AE240型分析天平（万分之一）。
土木香内酯对照品（批号110760-201008）、异土木香内酯对照品（批号110761-200204）均购自中国食品药品检定研究院；三味甘露散样品（批号090401、110301）由西藏藏医学院藏药有限公司提供，阴性样品自制；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（58∶42）；检测波长：225 nm；柱温30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 ?L。
2.2 对照品溶液的制备
取土木香内酯对照品、异土木香内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液（土木香内酯0.020 68 mg/mL，异土木香内酯0.026 88 mg/mL），即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品约2 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例及制备工艺，配制不含藏木香的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 空白试验
分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，测定。色谱图见图1。
1.异土木香内酯；2.土木香内酯
2.6 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液4、6、8、15、20、25 ?L，注入液相色谱仪，测定含量。结果表明，土木香内酯在0.083～0.517 ?g、异土木香内酯在0.108～0.672 ?g范围内均呈良好线性关系。回归方程分别为：土木香内酯C=1.389 5×10-7A+2.447 2×10-3，r=0.999 9；异土木香内酯C=1.603 6×10-7A+4.106 1×10-3，r=0.999 9。
2.7 精密度试验
精密吸取土木香内酯、异土木香内酯混合对照品溶液10 ?L，注入高效液相色谱仪，分别进样6次，测定峰面积，RSD分别为0.35%、0.56%，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号090401）10 ?L，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，RSD=0.77%，表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。
2.9 重复性试验
取同一批样品（批号090401）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，测得土木香内酯平均含量为2.02 mg/g，RSD=1.38%，异土木香内酯平均含量为2.58 mg/g，RSD=1.68%，表明该方法重复性好。
2.10 加样回收率试验
取已知土木香内酯、异土木香内酯含量的供试品（批号110301）6份，每份约1 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分别精密加入一定量混合对照品溶液（土木香内酯0.182 8 mg/mL、异土木香内酯0.191 4 mg/mL），按“2.3”项下方法制备并测定，结果见表1。
2.11 样品含量测定
取2批样品，每批做2份平行样，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依次测定土木香内酯、异土木香内酯含量，结果见表2。
3 讨论
在供试品溶液制备过程中，加甲醇25 mL，分别考察超声处理10、30、40、60 min，所得样品测定结果表明，超声处理30 min提取效果最佳。
本试验采用HPLC对处方中君药藏木香的有效成分土木香内酯和异土木香内酯进行测定。气相色谱法（GC）也是一种分析速度快、分离效率高的分离分析方法，在食品及土壤中农药残留检测领域应用颇为广泛[2-3]，常用于测定中药挥发性成分[4]。有文献报道采用GC测定土木香内酯、异土木香内酯含量[5-10]。对该制剂我们也采用GC进行含量测定，以乙酸乙酯为溶剂超声提取，氢火焰离子化检测器检测，采用程序升温，测得土木香内酯平均含量为2.06 mg/g，异土木香内酯平均含量为2.55 mg/g，与HPLC测定结果比较，含量值较低。因此，采用HPLC测定该处方中土木香内酯、异土木香内酯的含量，具有操作简便、快速、结果准确等特点，可更有效地控制三味甘露散的质量。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：藏药（第一册）[S].1995：258.
[2] 徐芳，王建芬，魏丹丹，等.GC法在检测农药残留中的研究进展[J].广东农业科学，2010，37（12）：161-163.
[3] 陈卫明，邓天龙，张勤，等.土壤中有机氯农药残留的分析技术研究进展[J].岩矿测试，2009，28（2）：151-156.
[4] 刘峰，马久太，单娜，等.GC法同时测定冠心疏通胶囊中丁香酚、龙脑和异龙脑[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（18）：56-59.
[5] 陈晓红，陈睿，陈元涛，等.果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定[J].医学导报，2011，30（9）：1210-1212.
[6] 查松其其格，那松巴乙拉.GC法测定都日布勒吉乌日勒中土木香内酯和异土木香内酯的含量[J].中国民族医药杂志，2011，17（5）：59-62.
[7] 王燕，王芸，孙文基.气相色谱内标法同时测定土木香中土木香内酯、异土木香内酯的含量[J].武警医学院学报，2010，19（7）：527-529.
[8] 王燕，张雅惠，格桑索朗，等.毛细管气相色谱内标法同时测定藏木香中土木香内酯、异土木香内酯的含量[J].药物分析杂志，2009，29（12）：2058-2060.
[9] 童丽，热增才旦，李文渊.GC法测定藏药玛努巴扎中的土木香内酯[J].中国中药杂志，2008，33（14）：1761-1762.
[10] 李庆斌，黄英栋，唐丽丽.气相色谱法测定冠心苏合胶囊中土木香内酯和异土木香内酯的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（15）：101-102.
（收稿日期：2013-05-28）
（修回日期：2014-04-08；编辑：陈静）
摘要：目的 建立同时测定三味甘露散中土木香内酯、异土木香内酯含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，光电二极管阵列检测器，色谱柱为CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0 mL/min，检测波长225 nm，柱温30 ℃。结果 土木香内酯在0.083～0.517 μg、异土木香内酯在0.108～0.672 μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 9；土木香内酯平均加样回收率为97.95%，RSD=1.31%；异土木香内酯平均加样回收率为97.69%，RSD=1.24%。结论 本方法操作简便，可快速、准确地测定三味甘露散中土木香内酯和异土木香内酯的含量。
关键词：三味甘露散；高效液相色谱法；土木香内酯；异土木香内酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.026
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）11-0085-03
三味甘露散收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·藏药》（第一册），由藏木香、寒水石（水煮）、异叶青兰组成[1]。原标准仅有鉴别及常规检查项，为更有效地控制该药品质量，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）对处方中君药藏木香的有效成分土木香内酯和异土木香内酯进行定量测定，现报道如下。
1 仪器与试药
C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），光电二极管阵列检测器；KQ-250B超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；德国SartoriusR200D型分析天平（十万分之一）；上海梅特勒AE240型分析天平（万分之一）。
土木香内酯对照品（批号110760-201008）、异土木香内酯对照品（批号110761-200204）均购自中国食品药品检定研究院；三味甘露散样品（批号090401、110301）由西藏藏医学院藏药有限公司提供，阴性样品自制；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（58∶42）；检测波长：225 nm；柱温30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 ?L。
2.2 对照品溶液的制备
取土木香内酯对照品、异土木香内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液（土木香内酯0.020 68 mg/mL，异土木香内酯0.026 88 mg/mL），即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品约2 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率300 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例及制备工艺，配制不含藏木香的阴性样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。
2.5 空白试验
分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，测定。色谱图见图1。
1.异土木香内酯；2.土木香内酯
2.6 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液4、6、8、15、20、25 ?L，注入液相色谱仪，测定含量。结果表明，土木香内酯在0.083～0.517 ?g、异土木香内酯在0.108～0.672 ?g范围内均呈良好线性关系。回归方程分别为：土木香内酯C=1.389 5×10-7A+2.447 2×10-3，r=0.999 9；异土木香内酯C=1.603 6×10-7A+4.106 1×10-3，r=0.999 9。
2.7 精密度试验
精密吸取土木香内酯、异土木香内酯混合对照品溶液10 ?L，注入高效液相色谱仪，分别进样6次，测定峰面积，RSD分别为0.35%、0.56%，表明仪器精密度良好。
2.8 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号090401）10 ?L，分别在0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，RSD=0.77%，表明供试品溶液在12 h内稳定性较好。
2.9 重复性试验
取同一批样品（批号090401）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，测得土木香内酯平均含量为2.02 mg/g，RSD=1.38%，异土木香内酯平均含量为2.58 mg/g，RSD=1.68%，表明该方法重复性好。
2.10 加样回收率试验
取已知土木香内酯、异土木香内酯含量的供试品（批号110301）6份，每份约1 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分别精密加入一定量混合对照品溶液（土木香内酯0.182 8 mg/mL、异土木香内酯0.191 4 mg/mL），按“2.3”项下方法制备并测定，结果见表1。
2.11 样品含量测定
取2批样品，每批做2份平行样，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依次测定土木香内酯、异土木香内酯含量，结果见表2。
3 讨论
在供试品溶液制备过程中，加甲醇25 mL，分别考察超声处理10、30、40、60 min，所得样品测定结果表明，超声处理30 min提取效果最佳。
本试验采用HPLC对处方中君药藏木香的有效成分土木香内酯和异土木香内酯进行测定。气相色谱法（GC）也是一种分析速度快、分离效率高的分离分析方法，在食品及土壤中农药残留检测领域应用颇为广泛[2-3]，常用于测定中药挥发性成分[4]。有文献报道采用GC测定土木香内酯、异土木香内酯含量[5-10]。对该制剂我们也采用GC进行含量测定，以乙酸乙酯为溶剂超声提取，氢火焰离子化检测器检测，采用程序升温，测得土木香内酯平均含量为2.06 mg/g，异土木香内酯平均含量为2.55 mg/g，与HPLC测定结果比较，含量值较低。因此，采用HPLC测定该处方中土木香内酯、异土木香内酯的含量，具有操作简便、快速、结果准确等特点，可更有效地控制三味甘露散的质量。
参考文献：
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准：藏药（第一册）[S].1995：258.
[2] 徐芳，王建芬，魏丹丹，等.GC法在检测农药残留中的研究进展[J].广东农业科学，2010，37（12）：161-163.
[3] 陈卫明，邓天龙，张勤，等.土壤中有机氯农药残留的分析技术研究进展[J].岩矿测试，2009，28（2）：151-156.
[4] 刘峰，马久太，单娜，等.GC法同时测定冠心疏通胶囊中丁香酚、龙脑和异龙脑[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（18）：56-59.
[5] 陈晓红，陈睿，陈元涛，等.果旭阿汤中土木香内酯和异土木香内酯的含量测定[J].医学导报，2011，30（9）：1210-1212.
[6] 查松其其格，那松巴乙拉.GC法测定都日布勒吉乌日勒中土木香内酯和异土木香内酯的含量[J].中国民族医药杂志，2011，17（5）：59-62.
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（收稿日期：2013-05-28）
（修回日期：2014-04-08；编辑：陈静）
