白细胞介素17在大鼠纤维化模型中的作用及意义
李中南+熊园园+李莉+方朝晖
摘要：目的 观察丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠趋化因子9（CXCL9）和白细胞介素-8（IL-8）表达的影响，探讨其干预2型糖尿病的作用机制。方法 取55只雄性SD大鼠，随机分为正常组、丹蛭高剂量组、丹蛭低剂量组、吡格列酮组、模型组。正常组予基础饲料喂养，其余各组给予高脂饲料喂养，采用链脲佐菌素单次腹腔注射35 mg/kg，建立糖尿病动物模型，120 h后测血糖。造模成功后，丹蛭高、低剂量组分别予丹蛭降糖胶囊1.08、0.54 g/（kg·d）灌胃，吡格列酮组予吡格列酮10 mg/（kg·d）灌胃，正常组和模型组给予生理盐水5 mL/（kg·d）灌胃，连续8周。双抗体夹心法测定大鼠血清中CXCL9和IL-8含量及血糖、血脂。结果 与正常组比较，模型组CXCL9和IL-8的表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，丹蛭高、低剂量组CXCL9、IL-8的高表达及血糖、血脂明显降低（P<0.01）。结论 丹蛭降糖胶囊具有抑制糖尿病炎症因子高表达，达到降低血糖、调节血脂的作用。
关键词：糖尿病；丹蛭降糖胶囊；趋化因子9；白细胞介素-8；大鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.12.013
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）12-0045-03
糖尿病属于亚临床炎症性病变，高血糖打破了机体内环境细胞因子的平衡状态，长期不良的血糖控制（血糖水平过高或波动过大）是导致慢性并发症的主要原因。糖尿病作为一种慢性炎症性疾病，趋化因子9（CXCL9）及白细胞介素-8（IL-8）等许多炎症因子在疾病发生发展过程中起不同的作用。以往研究表明，丹蛭降糖胶囊能改善2型糖尿病的脂代谢紊乱[1-2]。本实验观察丹蛭降糖胶囊对糖尿病模型大鼠CXCL9和IL-8的影响，探讨其干预2型糖尿病的作用机理。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
取健康雄性SD大鼠55只，清洁级，体质量（190±20）g，安徽医科大学动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK（皖）2012-2013。大鼠用基础饲料（蛋白质16%，碳水化合物50%，脂肪8%，购自安徽医科大学动物室）适应性喂养1周，随机抽取9只作为正常组，余为造模组。剔除造模未成功的大鼠5只，将造模成功的41只大鼠随机分成模型组11只、丹蛭低剂量组10只、丹蛭高剂量组10只、吡格列酮组10只，继续给予高脂饲料（蛋白质14%，脂肪25%，碳水化合物51%，胆固醇5%，猪油10%）喂养至实验结束。期间因血糖过高死亡2只，皮肤感染死亡2只。
1.2 药物、试剂与主要仪器
吡咯列酮片（杭州中美华东制药有限公司生产， 15 mg/片，批号130801）；丹蛭降糖胶囊（0.4 g/粒，由太子参、生地黄、牡丹皮、泽泻、水蛭等组成，安徽中医学院第一附属医院中药制剂中心生产，批号20060601）；链脲佐菌素（STZ，美国Sigma公司，批号S0130）；CXCL-9试剂盒（上海源叶生物科技有限公司，批号131208R）；IL-8试剂盒（上海源叶生物技术有限公司，批号132405R）。RT-6000型酶标仪（雷杜有限公司），JW3021HR型离心机（安徽嘉文仪器装备有限公司），GL-88B型漩涡混合器（其林贝尔仪器制造公司），移液器（eppendorf）。
1.3 造模与给药
造模组予高脂饲料喂养4周后进行造模。大鼠禁食8 h后，将STZ用0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH 4.4）配成2%浓度，按35 mg/kg大鼠左下腹单次注射，120 h后取尾静脉血测血糖，血糖≥16.7 mmol/L为造模成功。按人与大鼠单位体质量折算系数计算给药量，丹蛭高剂量组和丹蛭低剂量组予丹蛭降糖胶囊1.08、0.54 g/（kg·d）灌胃，吡格列酮组予吡格列酮片10 mg/（kg·d）灌胃，正常组和模型组予5 mL/（kg·d）生理盐水灌胃，连续给药8周。
1.4 指标检测
断尾取血，血糖监测仪测定血糖。称大鼠肾脏质量，比较各组肾脏质量值。末次给药后禁食8 h，以3%水合氯醛按10 mg/kg腹腔注射麻醉，迅速抽取腹主动脉血，冷冻保存送检。按照试剂盒说明书要求，检测CXCL9和IL-8。同时取血送安徽中医药大学第一附属医院检验科，全自动生化分析仪测定血脂。
1.5 统计学方法
采用SPSS17.0统计软件进行分析。实验数据以—x±s表示，组间比较采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠趋化因子9和白细胞介素-8的影响
模型组CXCL9和IL-8表达明显高于正常组（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，吡格列酮组和丹蛭高、低剂量组CXCL9和IL-8表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。见表1。
2.2 丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠血脂及肾质量的影响
模型组大鼠三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）水平较正常组明显升高（P<0.01）。丹蛭高、低剂量组TC、TG水平较模型组明显降低（P<0.01）。各组肾脏质量不一，模型组肾脏质量有增高趋势（P>0.05）。见表2。
2.3 丹蛭降糖胶囊对糖尿病大鼠血糖的影响
模型组血糖较正常组明显升高（P<0.01）。给药2周时，丹蛭高、低剂量组血糖较模型组明显降低 （P<0.01），且略低于吡格列酮组（P>0.05）。给药4、8周时，各给药组血糖均较模型组明显降低（P<0.01）。见表3。
3 讨论
本实验结果显示，模型组血糖均显著高于正常组，给药2周后，丹蛭高、低剂量组血糖显著下降，疗效优于吡格列酮组，大鼠灌胃4、8周复测血糖，显示血糖下降平稳，表明单用丹蛭降糖胶囊即有很好的降糖效果，其降糖作用可能是通过改善脂肪细胞的分化功能，脂肪组织对胰岛素敏感性增加，摄取血清中脂质的能力增强，改善了糖尿病的脂毒性，从而降低血糖。模型组、吡格列酮组和丹蛭高、低剂量组TC、TG均高于正常组，给药8周后，丹蛭高、低剂量组血脂显著降低，提示丹蛭降糖胶囊具有调脂的作用，这可能与调节瘦素的释放有关。endprint
CXCL9属CXC趋化因子亚家族成员，在机体中发挥重要的生理和病理效应，通过与其受体CXCR3结合而招募炎症细胞到达炎症部位。有研究显示，在激活的淋巴细胞迁移过程中趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11起主导作用，这一结果与传统上认为趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11对Th1细胞具有强大的募集作用相一致，表明CXCL9在炎症中起重要作用[3]。本研究结果显示，模型组大鼠CXCL9表达显著高于正常组，提示CXCL9参与了糖尿病的发生发展。灌胃给药8周后，丹蛭高、低剂量组CXCL9水平显著降低，说明丹蛭降糖胶囊对模型大鼠CXCL9高表达有显著抑制作用。有研究表明，地黄对免疫系统的诸阶段显示增强或抑制作用，参与维护机体的稳定，地黄多糖是地黄中兼具免疫与抑瘤作用的活性成分，在体内和体外实验中均能明显提高正常小鼠淋巴细胞的增值反应能力，显示明显的免疫调节活性[4]。太子参中所含多糖粗提物能够明显增强人体免疫力，太子参75%醇提物能够增加胸腺、脾脏质量，同时还能降低人体脾虚的发生率。牡丹皮具有清热凉血、活血散瘀之功效，丹皮总苷对由刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖和分泌，以及由脂多糖诱导B淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖和分泌功能，具有浓度依赖性双向免疫调节作用，还可以调节小鼠体液和细胞免疫，具有保护心血管、抗动脉硬化、降血糖、抗炎等作用。丹蛭降糖胶囊通过中药组合，调节机体免疫平衡，抑制了炎症因子过高表达。
IL-8主要是由单核-巨噬细胞产生的一种细胞因子，可使中性粒细胞趋化、脱颗粒、释放溶酶、加强炎症反应，在疾病发生、发展过程中起重要作用。有研究表明，2型糖尿病患者的IL-8高于对照组，说明2型糖尿病患者存在慢性炎症反应[5]。IL-8可刺激平滑肌细胞移动和增殖，在局部形成损害，导致增加白细胞或血小板对内皮细胞的黏附性和通透性，促进血凝，并诱导产生血管活性因子等使血管阻力增加，肾血管内皮功能受损。IL-8还可刺激血管内皮细胞因子的释放，使肾系膜细胞增生，肾小球血管通透性增强，导致蛋白尿的发生和发展，促进肾小球硬化，从而加速了糖尿病肾病的发展。本实验结果显示，模型组IL-8表达量明显高于正常组（P<0.01），丹蛭高、低剂量组IL-8表达量较模型组显著降低（P<0.01），说明丹蛭降糖胶囊可抑制IL-8的高表达。有研究表明，水蛭对炎症的早期及后期病理改变均有抑制作用，对急慢性炎症有一定的控制作用，具有类炎性介质拮抗作用，可高效清除循环免疫复合物，调节机体免疫功能[6]。综上，丹蛭降糖胶囊具有降糖、降脂作用，其机理可能通过增强人体免疫功能，多靶点多途径抑制炎症因子中CXCL9、IL-8高表达，清除免疫复合物，而发挥作用。
参考文献：
[1] 李中南，陈光亮，李丽，等.益气养阴活血法对糖尿病模型大鼠血单核细胞趋化因子及血浆纤溶酶原激活物抑制剂水平的影响[J].中国临床保健杂志，2013，16（4）：397-399.
[2] 吴元洁，方朝晖，郑书国.丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺氧化应激及胰岛功能的影响[J].中国中西医结合杂志，2012，32（11）：1531-1534.
[3] 赵之，李芳.趋化因子及趋化因子受体3在自身免疫疾病中的作用[J].中国微生态学杂志，2010，22（10）：958-961.
[4] 魏桂芳，刘雪萍，何希瑞.地黄药理与临床应用[J].陕西中医，2013， 34（8）：1073-1074.
[5] 郄会卿，董焕娥.2型糖尿病患者血清IL-6、IL-8的变化及临床意义[J].河北医药，2009，31（3）：381-383.
[6] 杨洪雁，杜智恒，白秀娟.水蛭药理作用的研究进展[J].东北农业大学学报，2012，4（3）：128-133.
（收稿日期：2014-04-03；编辑：华强）endprint
CXCL9属CXC趋化因子亚家族成员，在机体中发挥重要的生理和病理效应，通过与其受体CXCR3结合而招募炎症细胞到达炎症部位。有研究显示，在激活的淋巴细胞迁移过程中趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11起主导作用，这一结果与传统上认为趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11对Th1细胞具有强大的募集作用相一致，表明CXCL9在炎症中起重要作用[3]。本研究结果显示，模型组大鼠CXCL9表达显著高于正常组，提示CXCL9参与了糖尿病的发生发展。灌胃给药8周后，丹蛭高、低剂量组CXCL9水平显著降低，说明丹蛭降糖胶囊对模型大鼠CXCL9高表达有显著抑制作用。有研究表明，地黄对免疫系统的诸阶段显示增强或抑制作用，参与维护机体的稳定，地黄多糖是地黄中兼具免疫与抑瘤作用的活性成分，在体内和体外实验中均能明显提高正常小鼠淋巴细胞的增值反应能力，显示明显的免疫调节活性[4]。太子参中所含多糖粗提物能够明显增强人体免疫力，太子参75%醇提物能够增加胸腺、脾脏质量，同时还能降低人体脾虚的发生率。牡丹皮具有清热凉血、活血散瘀之功效，丹皮总苷对由刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖和分泌，以及由脂多糖诱导B淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖和分泌功能，具有浓度依赖性双向免疫调节作用，还可以调节小鼠体液和细胞免疫，具有保护心血管、抗动脉硬化、降血糖、抗炎等作用。丹蛭降糖胶囊通过中药组合，调节机体免疫平衡，抑制了炎症因子过高表达。
IL-8主要是由单核-巨噬细胞产生的一种细胞因子，可使中性粒细胞趋化、脱颗粒、释放溶酶、加强炎症反应，在疾病发生、发展过程中起重要作用。有研究表明，2型糖尿病患者的IL-8高于对照组，说明2型糖尿病患者存在慢性炎症反应[5]。IL-8可刺激平滑肌细胞移动和增殖，在局部形成损害，导致增加白细胞或血小板对内皮细胞的黏附性和通透性，促进血凝，并诱导产生血管活性因子等使血管阻力增加，肾血管内皮功能受损。IL-8还可刺激血管内皮细胞因子的释放，使肾系膜细胞增生，肾小球血管通透性增强，导致蛋白尿的发生和发展，促进肾小球硬化，从而加速了糖尿病肾病的发展。本实验结果显示，模型组IL-8表达量明显高于正常组（P<0.01），丹蛭高、低剂量组IL-8表达量较模型组显著降低（P<0.01），说明丹蛭降糖胶囊可抑制IL-8的高表达。有研究表明，水蛭对炎症的早期及后期病理改变均有抑制作用，对急慢性炎症有一定的控制作用，具有类炎性介质拮抗作用，可高效清除循环免疫复合物，调节机体免疫功能[6]。综上，丹蛭降糖胶囊具有降糖、降脂作用，其机理可能通过增强人体免疫功能，多靶点多途径抑制炎症因子中CXCL9、IL-8高表达，清除免疫复合物，而发挥作用。
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（收稿日期：2014-04-03；编辑：华强）endprint
CXCL9属CXC趋化因子亚家族成员，在机体中发挥重要的生理和病理效应，通过与其受体CXCR3结合而招募炎症细胞到达炎症部位。有研究显示，在激活的淋巴细胞迁移过程中趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11起主导作用，这一结果与传统上认为趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11对Th1细胞具有强大的募集作用相一致，表明CXCL9在炎症中起重要作用[3]。本研究结果显示，模型组大鼠CXCL9表达显著高于正常组，提示CXCL9参与了糖尿病的发生发展。灌胃给药8周后，丹蛭高、低剂量组CXCL9水平显著降低，说明丹蛭降糖胶囊对模型大鼠CXCL9高表达有显著抑制作用。有研究表明，地黄对免疫系统的诸阶段显示增强或抑制作用，参与维护机体的稳定，地黄多糖是地黄中兼具免疫与抑瘤作用的活性成分，在体内和体外实验中均能明显提高正常小鼠淋巴细胞的增值反应能力，显示明显的免疫调节活性[4]。太子参中所含多糖粗提物能够明显增强人体免疫力，太子参75%醇提物能够增加胸腺、脾脏质量，同时还能降低人体脾虚的发生率。牡丹皮具有清热凉血、活血散瘀之功效，丹皮总苷对由刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞增殖和分泌，以及由脂多糖诱导B淋巴细胞和腹腔巨噬细胞增殖和分泌功能，具有浓度依赖性双向免疫调节作用，还可以调节小鼠体液和细胞免疫，具有保护心血管、抗动脉硬化、降血糖、抗炎等作用。丹蛭降糖胶囊通过中药组合，调节机体免疫平衡，抑制了炎症因子过高表达。
IL-8主要是由单核-巨噬细胞产生的一种细胞因子，可使中性粒细胞趋化、脱颗粒、释放溶酶、加强炎症反应，在疾病发生、发展过程中起重要作用。有研究表明，2型糖尿病患者的IL-8高于对照组，说明2型糖尿病患者存在慢性炎症反应[5]。IL-8可刺激平滑肌细胞移动和增殖，在局部形成损害，导致增加白细胞或血小板对内皮细胞的黏附性和通透性，促进血凝，并诱导产生血管活性因子等使血管阻力增加，肾血管内皮功能受损。IL-8还可刺激血管内皮细胞因子的释放，使肾系膜细胞增生，肾小球血管通透性增强，导致蛋白尿的发生和发展，促进肾小球硬化，从而加速了糖尿病肾病的发展。本实验结果显示，模型组IL-8表达量明显高于正常组（P<0.01），丹蛭高、低剂量组IL-8表达量较模型组显著降低（P<0.01），说明丹蛭降糖胶囊可抑制IL-8的高表达。有研究表明，水蛭对炎症的早期及后期病理改变均有抑制作用，对急慢性炎症有一定的控制作用，具有类炎性介质拮抗作用，可高效清除循环免疫复合物，调节机体免疫功能[6]。综上，丹蛭降糖胶囊具有降糖、降脂作用，其机理可能通过增强人体免疫功能，多靶点多途径抑制炎症因子中CXCL9、IL-8高表达，清除免疫复合物，而发挥作用。
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（收稿日期：2014-04-03；编辑：华强）endprint
