水煎提取及浓缩工艺对感冒退热颗粒有效成分的影响
杨贝贝+王宝华+李萍+季文琴+孟庆卿+施金钹+李丽娟
摘要：目的 考察感冒退热颗粒处方药材在水煎提取、减压浓缩、常压浓缩过程中有效成分表告依春、连翘酯苷A、连翘苷转移率的变化。方法 感冒退热颗粒处方药材水煎提取后，分别进行减压浓缩和常压浓缩，采用高效液相色谱法（HPLC）测定不同状态下有效成分表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的含量，计算转移率。结果 水煎提取后，表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的转移率分别为72.97%、29.27%、72.84%，减压浓缩过程中3种指标性成分转移率RSD<2%，浓缩至相同状态时，常压浓缩表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的转移率分别比减压浓缩降低了13.51%、7.38%、4.24%。结论 本研究建立了同时检测表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的HPLC方法，感冒退热颗粒的制剂工艺应据此选择合理的提取和浓缩工艺。
关键词：感冒退热颗粒；水煎提取；浓缩；有效成分
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.022
中图分类号：R283.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2016）01-0093-03
Effects of Water-extracting and Concentration Process on Active Ingredients of Ganmao Tuire Granules YANG Bei-bei1， WANG Bao-hua1， LI Ping1， JI Wen-qin1， MENG Qing-qing1， SHI Jin-bo1， LI Li-juan2 （1. School of Chinese Materia Medica， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100102， China； 2. Shexian Chinese Medicine Hospital， Shexian 056400， China）
Abstract： Objective To observe the changes in transfer rates of epigoitrin， forsythoside A and forsythin in Ganmao Tuire Granules prescription medicinal materials by water decoction extraction， vacuum concentration and atmospheric concentration. Methods Prescription medicinal materials from Ganmao Tuire Granules were decocted in water and the decoction was condensed by vacuum and atmospheric concentration process. The contents of epigoitrin， forsythoside A and forsythin at different states were measured by HPLC for transfer rates. Results The transfer rates of epigoitrin， forsythoside A and forsythin were 72.97%， 29.27%， 72.84%， respectively after decocted in water. The RSD of epigoitrin， forsythoside A and forsythin were less than 2% in the process of vacuum concentration. The transfer rates of epigoitrin， forsythoside A and forsythin by atmospheric concentration decreased by 13.51%， 7.38% and 4.24% respectively compared with vacuum concentration when concentrated to the same state. Conclusion The method for simultaneous determination of epigoitrin， forsythoside A and forsythin by HPLC has been established. A more suitable extraction and concentration process should be chosen for the preparation of Ganmao Tuire Granules.
Key words： Ganmao Tuire Granules； water decoction extraction； concentration； active ingredients
感冒退热颗粒由大青叶、板蓝根、连翘及拳参4味中药组成，具有清热解毒、疏风解表功效，临床用于上呼吸道感染、急性扁桃体炎、咽喉炎属外感风热、热毒壅盛证[1]。药理研究表明，板蓝根中的表告依春，连翘中的连翘酯苷A、连翘苷为感冒退热颗粒的主要抗菌和抗病毒成分[2-4]。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定表告依春、连翘酯苷A、连翘苷含量，考察感冒退热颗粒处方药材在水煎提取、减压浓缩、常压浓缩过程中3种有效成分转移率的变化，
以期为感冒退热颗粒的工艺生产及优化提供依据。
1 仪器与试药
岛津LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）：SPD-20A二级阵列检测器（PDA），SIL-20A自动进样器，DGU-20A5在线脱气机，CTO-10ASvp柱温箱和岛津LC-solution工作站；KQ-300DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Sartorious BT 125D型电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；YP6001型电子天平（上海佑科仪器仪表有限公司）；SHZ-Ⅲ循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；0.45 μm微孔滤膜（天津市津腾实验设备有限公司）。
表告依春、连翘酯苷A、连翘苷对照品（成都曼思特生物科技有限公司，批号分别为MUST-14111807、MUST-14060118、MUST-14052103，纯度≥98%），甲醇（色谱纯，Fisher公司），磷酸（分析纯，北京北化精细化学品有限责任公司），娃哈哈纯净水，自制高纯水，其他试剂均为分析纯。板蓝根、大青叶、连翘、拳参饮片购于北京同仁堂健康药业股份有限公司，经北京中医药大学刘春生教授鉴定，分别为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根、十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥叶、木犀科植物连翘Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果实、蓼科植物拳参Polygonum bistorta L.的干燥根茎。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Purospher STAR C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.02%磷酸水溶液，梯度洗脱（0～17 min，9%A；19 min，32%A；29 min，34%A；39 min，35%A；44 min，40%A；54～60 min，54%A）；流速为1.0 mL/min；检测波长为227 nm；检测温度为30 ℃。色谱图见图1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取表告依春对照品0.93 mg、连翘苷对照品9.40 mg于50 mL容量瓶中，连翘酯苷A对照品10.06 mg于10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，即得对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取板蓝根药材粉末（过四号筛）0.2 g、大青叶药材粉末（过四号筛）0.2 g、连翘药材粉末（过五号筛）0.1 g、拳参药材粉末（过四号筛）0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇40 mL，称定质量，超声处理（功率400 W，频率40 kHz）60 min，放冷，静置10 h，再称定质量，补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2.2.3 水煎液、浓缩液供试品溶液的制备 按感冒退热颗粒处方比例取大青叶、板蓝根、连翘、拳参，加8倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，合并煎煮液，过滤[1]，得感冒退热颗粒水煎液，测量准确体积，留取一定量原水煎液，取500 mL水煎液称重，分别于70 ℃不同程度减压浓缩、100 ℃常压浓缩，称重，将浓缩液用容量瓶稀释定容至500 mL，精密吸取5 mL上述溶液于25 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，静置10 h，过滤，取续滤液，作为感冒退热颗粒处方水煎液、减压浓缩液和常压浓缩液的供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取表告依春、连翘苷对照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.8、2.6 mL于10 mL容量瓶中，精密吸取连翘酯苷A对照品溶液0.4、0.8、1.2、2.5、5.0、8.0 mL于10 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析，进样10 μL。以峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1。表告依春、连翘酯苷A、连翘苷3种成分在线性范围内与峰面积均呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积，表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的RSD分别为1.59%、0.14%、1.43%，表明仪器精密度良好。
2.5 重复性试验
精密称取同一批次板蓝根、大青叶、连翘、拳参6份，按“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，进样10 μL，测定峰面积，表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的RSD分别为1.52%、0.45%、2.01%，表明方法重复性良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别在0、3、6、12、24 h测定峰面积，表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的RSD分别为1.57%、0.88%、1.41%，说明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 加样回收率试验
称取板蓝根粉末0.2 g、大青叶粉末0.2 g、连翘粉末0.1 g、拳参粉末0.1 g，精密称定6份，每份精密加入一定量表告依春、连翘酯苷A、连翘苷，制成供试品溶液，测定峰面积，计算加样回收率。结果表明表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的平均加样回收率分别为98.24%、99.43%、99.21%，RSD分别为2.41%、2.84%、2.40%，加样回收率符合要求。
2.8 药材含量测定
按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，进样10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算表告依春、连翘酯苷A、连翘苷含量分别为0.37、110.30、7.07 mg/g，符合《中华人民共和国药典》规定。
2.9 水煎液、浓缩液含量测定
分别取“2.2.3”项下水煎液及浓缩液供试品，进样10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，计算表告依春、连翘酯苷A、连翘苷含量及转移率[水煎液（浓缩液）中该成分含量÷药材中该成分含量×100%]，结果见表2。
3 讨论
根据表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的极性和溶解度，本试验考察了甲醇、50%甲醇、水等溶剂的回流提取和超声提取，发现用50%甲醇超声提取较为充分。经紫外全波长扫描，在227 nm下，3个成分有较高吸收。本试验考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液、乙腈-0.02%磷酸水溶液等多种溶剂洗脱系统，结果发现甲醇-0.02%磷酸水溶液作为流动相梯度洗脱时3个有效成分的峰形和分离度均较好。
文献报道不同厂家不同批次的感冒退热颗粒中表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的含量差异较大[5-7]，原因可能是药材来源或生产工艺的差异。本试验建立了同时检测表告依春、连翘酯苷A、连翘苷3个有效成分的HPLC方法，并考察了感冒退热颗粒处方水煎液及浓缩液中有效成分的转移率，结果显示，水煎提取后，表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的转移率分别为72.97%、29.27%、72.84%，各成分尤其是连翘酯苷A在提取过程中损失较大，可能与水煎提取不完全及提取温度较高、时间较长有关。原水煎液由502.1 g减压浓缩至360.9、189.8、11.9 g的过程中，表告依春、连翘酯苷A、连翘苷的转移率RSD<2%，因此，在减压浓缩过程中3种有效成分几乎没有变化；减压浓缩和常压浓缩均浓缩至11.9 g时，常压浓缩时表告依春、连翘酯苷A、连翘苷转移率分别比减压浓缩降低了13.51%、7.38%、4.24%，故减压浓缩较常压浓缩有利于防止有效成分的损失。本研究对中成药感冒退热颗粒的工艺优化及质量控制有一定的参考价值。当然，由于样品量较少，对于大工业生产是否有同样的规律，还有待于今后进一步研究。
参考文献：
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（收稿日期：2015-04-13）
（修回日期：2015-05-05；编辑：陈静）
