...为研究人员正在使用高效液相色谱仪检测血脂康胶囊的指纹谱....
摘要：目的 对乳癖康胶囊的高效液相指纹图谱进行方法学研究。方法 采用高效液相色谱法，对乳癖康胶囊图谱的精密度、稳定性、重复性进行了考察。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：水-0.1%磷酸水-乙腈，线性梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm。结果 乳癖康胶囊图谱的精密度、稳定性、重复性均符合高效液相指纹图谱的技术要求。结论 本方法简便可行，可作为乳癖康胶囊的整体质量控制方法。
关键词：乳癖康胶囊；高效液相色谱法；丹酚酸B；橙皮苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.09.024
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）09-0084-02
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药及其制剂中的各种组分群体特性的共有峰的图谱。通过指纹图谱整体特征峰的相对保留时间及含量或比例的制定和比对，可有效地控制中药材及中药产品质量，保证产品质量的相对稳定。指纹图谱为中药质量控制提供了新的发展方向，使中药质量的量化进入新的层次。目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。采用高效液相色谱法（HPLC）进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。由于中药成分的复杂性，逐步提高流动相洗脱能力可获得较多色谱峰，提供更多指纹信息，故构建中药指纹图谱一般采用梯度洗脱[1]。
乳癖康胶囊由乳癖康片经剂型改进而成。乳癖康片收载于《国家中成药标准汇编》，由夏枯草、丹参、香附、橘叶、红花、郁金、皂角刺、地龙等药物组成，具有疏肝理气、活血化瘀的功效。乳癖康胶囊指纹图
基金项目：山东省中医药科技发展计划（2011-030）
谱的前期研究选定了最佳提取溶剂、提取方法、检测波长、洗脱溶剂、洗脱方法等[2]，本研究在此基础上对方法学进行严格考察和验证，为乳癖康胶囊复方指纹图谱的建立奠定基础。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司，配置为脱气机、四元泵、柱温箱和DAD检测器；L2400高效液相色谱仪，日本日立公司；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；XO-5200D数控超声波清洗器，南京先欧仪器制造有限公司；电子天平，Sartorius BSA124S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。
橙皮苷对照品（批号0721-200010）、丹酚酸B对照品（批号MUST-12020104），中国药品生物制品检定所；乳癖康胶囊（批号20130603、20130713、20130917），自制；乙腈、甲醇均为色谱纯，无水乙醇等为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
取乳癖康胶囊粉末约1 g，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加入80%甲醇10 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）20 min，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2 对照品溶液的制备
精密称定丹酚酸B对照品3 mg，置10 mL棕色容量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹酚酸B对照品溶液。
精密称定橙皮苷对照品2 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品溶液。
2.3
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取第1批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，按“2.1”项下方法制备，连续进样6次进行测定，计算特征峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差（RSD）。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的特征色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.2216%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.8956%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.2 稳定性试验 取第2批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，按“2.1”项下方法制备，分别于0、4、8、16、24、48 h进样测定。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.2209%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.9026%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.3 重复性试验 取第2批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，共取6份， 按“2.1”项下方法制备，分别进行测定。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.295 7%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.665%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.4 共有峰的标定 参考国家食品药品监督管理局制定的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》（国药管注〔2000〕348号），运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2004A版，根据乳癖康胶囊指纹图谱的相关参数，10批样品的指纹图谱相似度均在0.976以上，且色谱峰基本一致，因此，以该10批样品用平均数法模拟生成了乳癖康胶囊的对照指纹图谱（峰S为参照物橙皮苷），并归纳确定乳癖康胶囊的HPLC指纹图谱具有14个共有的基本特征峰，见图2。乳癖康胶囊的指纹特征峰从左到右依次为：1号峰为1个尖峰，分离较好；2号峰左侧和右侧各带有1个尖峰；3号峰为1个尖峰，分离较好；4号峰左侧有1个小峰；5号峰为2个单峰；6号峰右侧带有1个尖峰；7号峰右侧有1个小峰，比较稳定；8、9、10、11、12号峰比较稳定，分离较好；13号峰形宽；14号峰为一个尖峰，分离较好。
3 讨论
根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》的规定，与中药指纹图谱有关的技术参数主要有：保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比、相对保留时间、相对积分面积比值以及非共有峰面积等。其中，保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比等技术参数受色谱条件等因素的影响较大。而同一样品在同一色谱条件下的相对保留时间、相对积分面积比值相对固定，是中药指纹图谱的2个核心参数，可作为指纹图谱评价的重要变量。
参考文献：
[1] 徐今宁，龙卿，秦秀丽.中药指纹图谱技术的研究现状及应用[J].时珍国医国药，2006，4（11）：2311.
[2] 王俊香，王冬英，李军勇.HPLC测定消癖康胶囊中橙皮苷和丹酚酸B的含量[J].中成药，2007，29（9）：1313-1315.
（收稿日期：2014-01-16；编辑：陈静）
摘要：目的 对乳癖康胶囊的高效液相指纹图谱进行方法学研究。方法 采用高效液相色谱法，对乳癖康胶囊图谱的精密度、稳定性、重复性进行了考察。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：水-0.1%磷酸水-乙腈，线性梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm。结果 乳癖康胶囊图谱的精密度、稳定性、重复性均符合高效液相指纹图谱的技术要求。结论 本方法简便可行，可作为乳癖康胶囊的整体质量控制方法。
关键词：乳癖康胶囊；高效液相色谱法；丹酚酸B；橙皮苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.09.024
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）09-0084-02
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药及其制剂中的各种组分群体特性的共有峰的图谱。通过指纹图谱整体特征峰的相对保留时间及含量或比例的制定和比对，可有效地控制中药材及中药产品质量，保证产品质量的相对稳定。指纹图谱为中药质量控制提供了新的发展方向，使中药质量的量化进入新的层次。目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。采用高效液相色谱法（HPLC）进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。由于中药成分的复杂性，逐步提高流动相洗脱能力可获得较多色谱峰，提供更多指纹信息，故构建中药指纹图谱一般采用梯度洗脱[1]。
乳癖康胶囊由乳癖康片经剂型改进而成。乳癖康片收载于《国家中成药标准汇编》，由夏枯草、丹参、香附、橘叶、红花、郁金、皂角刺、地龙等药物组成，具有疏肝理气、活血化瘀的功效。乳癖康胶囊指纹图
基金项目：山东省中医药科技发展计划（2011-030）
谱的前期研究选定了最佳提取溶剂、提取方法、检测波长、洗脱溶剂、洗脱方法等[2]，本研究在此基础上对方法学进行严格考察和验证，为乳癖康胶囊复方指纹图谱的建立奠定基础。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司，配置为脱气机、四元泵、柱温箱和DAD检测器；L2400高效液相色谱仪，日本日立公司；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；XO-5200D数控超声波清洗器，南京先欧仪器制造有限公司；电子天平，Sartorius BSA124S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。
橙皮苷对照品（批号0721-200010）、丹酚酸B对照品（批号MUST-12020104），中国药品生物制品检定所；乳癖康胶囊（批号20130603、20130713、20130917），自制；乙腈、甲醇均为色谱纯，无水乙醇等为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
取乳癖康胶囊粉末约1 g，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加入80%甲醇10 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）20 min，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2 对照品溶液的制备
精密称定丹酚酸B对照品3 mg，置10 mL棕色容量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹酚酸B对照品溶液。
精密称定橙皮苷对照品2 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品溶液。
2.3
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取第1批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，按“2.1”项下方法制备，连续进样6次进行测定，计算特征峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差（RSD）。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的特征色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.2216%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.8956%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.2 稳定性试验 取第2批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，按“2.1”项下方法制备，分别于0、4、8、16、24、48 h进样测定。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.2209%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.9026%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.3 重复性试验 取第2批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，共取6份， 按“2.1”项下方法制备，分别进行测定。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.295 7%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.665%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.4 共有峰的标定 参考国家食品药品监督管理局制定的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》（国药管注〔2000〕348号），运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2004A版，根据乳癖康胶囊指纹图谱的相关参数，10批样品的指纹图谱相似度均在0.976以上，且色谱峰基本一致，因此，以该10批样品用平均数法模拟生成了乳癖康胶囊的对照指纹图谱（峰S为参照物橙皮苷），并归纳确定乳癖康胶囊的HPLC指纹图谱具有14个共有的基本特征峰，见图2。乳癖康胶囊的指纹特征峰从左到右依次为：1号峰为1个尖峰，分离较好；2号峰左侧和右侧各带有1个尖峰；3号峰为1个尖峰，分离较好；4号峰左侧有1个小峰；5号峰为2个单峰；6号峰右侧带有1个尖峰；7号峰右侧有1个小峰，比较稳定；8、9、10、11、12号峰比较稳定，分离较好；13号峰形宽；14号峰为一个尖峰，分离较好。
3 讨论
根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》的规定，与中药指纹图谱有关的技术参数主要有：保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比、相对保留时间、相对积分面积比值以及非共有峰面积等。其中，保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比等技术参数受色谱条件等因素的影响较大。而同一样品在同一色谱条件下的相对保留时间、相对积分面积比值相对固定，是中药指纹图谱的2个核心参数，可作为指纹图谱评价的重要变量。
参考文献：
[1] 徐今宁，龙卿，秦秀丽.中药指纹图谱技术的研究现状及应用[J].时珍国医国药，2006，4（11）：2311.
[2] 王俊香，王冬英，李军勇.HPLC测定消癖康胶囊中橙皮苷和丹酚酸B的含量[J].中成药，2007，29（9）：1313-1315.
（收稿日期：2014-01-16；编辑：陈静）
摘要：目的 对乳癖康胶囊的高效液相指纹图谱进行方法学研究。方法 采用高效液相色谱法，对乳癖康胶囊图谱的精密度、稳定性、重复性进行了考察。色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：水-0.1%磷酸水-乙腈，线性梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：280 nm。结果 乳癖康胶囊图谱的精密度、稳定性、重复性均符合高效液相指纹图谱的技术要求。结论 本方法简便可行，可作为乳癖康胶囊的整体质量控制方法。
关键词：乳癖康胶囊；高效液相色谱法；丹酚酸B；橙皮苷
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.09.024
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2014）09-0084-02
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药及其制剂中的各种组分群体特性的共有峰的图谱。通过指纹图谱整体特征峰的相对保留时间及含量或比例的制定和比对，可有效地控制中药材及中药产品质量，保证产品质量的相对稳定。指纹图谱为中药质量控制提供了新的发展方向，使中药质量的量化进入新的层次。目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的最有效手段。采用高效液相色谱法（HPLC）进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。由于中药成分的复杂性，逐步提高流动相洗脱能力可获得较多色谱峰，提供更多指纹信息，故构建中药指纹图谱一般采用梯度洗脱[1]。
乳癖康胶囊由乳癖康片经剂型改进而成。乳癖康片收载于《国家中成药标准汇编》，由夏枯草、丹参、香附、橘叶、红花、郁金、皂角刺、地龙等药物组成，具有疏肝理气、活血化瘀的功效。乳癖康胶囊指纹图
基金项目：山东省中医药科技发展计划（2011-030）
谱的前期研究选定了最佳提取溶剂、提取方法、检测波长、洗脱溶剂、洗脱方法等[2]，本研究在此基础上对方法学进行严格考察和验证，为乳癖康胶囊复方指纹图谱的建立奠定基础。
1 仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司，配置为脱气机、四元泵、柱温箱和DAD检测器；L2400高效液相色谱仪，日本日立公司；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；XO-5200D数控超声波清洗器，南京先欧仪器制造有限公司；电子天平，Sartorius BSA124S，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。
橙皮苷对照品（批号0721-200010）、丹酚酸B对照品（批号MUST-12020104），中国药品生物制品检定所；乳癖康胶囊（批号20130603、20130713、20130917），自制；乙腈、甲醇均为色谱纯，无水乙醇等为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备
取乳癖康胶囊粉末约1 g，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密加入80%甲醇10 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）20 min，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2 对照品溶液的制备
精密称定丹酚酸B对照品3 mg，置10 mL棕色容量瓶中，加75%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹酚酸B对照品溶液。
精密称定橙皮苷对照品2 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得橙皮苷对照品溶液。
2.3
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取第1批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，按“2.1”项下方法制备，连续进样6次进行测定，计算特征峰的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差（RSD）。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的特征色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.2216%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.8956%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.2 稳定性试验 取第2批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，按“2.1”项下方法制备，分别于0、4、8、16、24、48 h进样测定。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.2209%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.9026%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.3 重复性试验 取第2批乳癖康胶囊粉末1.0 g，精密称定，共取6份， 按“2.1”项下方法制备，分别进行测定。结果表明，峰面积占总峰面积2%以上的色谱峰，其相对保留时间的RSD均<0.295 7%，相对保留峰面积比值的RSD均<2.665%，均在3%以内，符合指纹图谱技术要求。
2.4.4 共有峰的标定 参考国家食品药品监督管理局制定的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》（国药管注〔2000〕348号），运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2004A版，根据乳癖康胶囊指纹图谱的相关参数，10批样品的指纹图谱相似度均在0.976以上，且色谱峰基本一致，因此，以该10批样品用平均数法模拟生成了乳癖康胶囊的对照指纹图谱（峰S为参照物橙皮苷），并归纳确定乳癖康胶囊的HPLC指纹图谱具有14个共有的基本特征峰，见图2。乳癖康胶囊的指纹特征峰从左到右依次为：1号峰为1个尖峰，分离较好；2号峰左侧和右侧各带有1个尖峰；3号峰为1个尖峰，分离较好；4号峰左侧有1个小峰；5号峰为2个单峰；6号峰右侧带有1个尖峰；7号峰右侧有1个小峰，比较稳定；8、9、10、11、12号峰比较稳定，分离较好；13号峰形宽；14号峰为一个尖峰，分离较好。
3 讨论
根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》的规定，与中药指纹图谱有关的技术参数主要有：保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比、相对保留时间、相对积分面积比值以及非共有峰面积等。其中，保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比等技术参数受色谱条件等因素的影响较大。而同一样品在同一色谱条件下的相对保留时间、相对积分面积比值相对固定，是中药指纹图谱的2个核心参数，可作为指纹图谱评价的重要变量。
参考文献：
[1] 徐今宁，龙卿，秦秀丽.中药指纹图谱技术的研究现状及应用[J].时珍国医国药，2006，4（11）：2311.
[2] 王俊香，王冬英，李军勇.HPLC测定消癖康胶囊中橙皮苷和丹酚酸B的含量[J].中成药，2007，29（9）：1313-1315.
（收稿日期：2014-01-16；编辑：陈静）
