响应面法优化金龙胆草总黄酮的超声波提取工艺的研究.pdf
高建德+朱晓玉+刘雄+陈晖+宋开蓉+师婷婷
摘要：目的 采用响应面法优化复合酶提取枸杞子总黄酮的工艺条件。方法 在单因素试验基础上，选择酶用量、酶解时间、酶解温度为因素，进行3因素3水平的中心组合设计，采用响应面法分析3个因素对枸杞子总黄酮得率的影响。结果 复合酶辅助提取枸杞子总黄酮的工艺路线为：复合酶用量0.30%，酶解时间1.0 h，酶解温度60 ℃。总黄酮得率预测值为0.949 2%。结论 响应面法优化复合酶辅助提取枸杞子总黄酮的方法稳定可行，操作简单，可为深入研究及应用提供依据。
关键词：响应面法；工艺优化；复合酶提取；枸杞子总黄酮
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.016
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）07-0066-06
Abstract： Objective To optimize the extraction technology of total flavonoids from Lycii Fructus by response surface methodology （RSM）. Methods On the basis of single-factor tests， enzyme concentration， enzymolysis time， and enzyme solution temperature were selected as influencing factors during extraction to conduct three-factor three-level center combination design. The effects of three factors on the yield of total flavonoids from Lycii Fructus were analyzed by RSM. Results The optimum conditions for extraction technology of total flavonoids from Lycii Fructus were enzyme concentration 0.30%， enzymolysis time 1.0 h， enzyme solution temperature 60 ℃. The predicted extraction yield of total flavonoids was 0.949 2%. Conclusion Using RSM to optimize the extraction technology of total flavonoids from Lycii Fructus is stable， feasible， and simple， which can provide references for further study and application.
Key words： response surface method； technology optimization； compound enzyme extraction； total flavonoids from Lycii Fructus
枸杞子是茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实[1]，性平，味甘、微苦，无毒，具有滋养肝肾、润肺益气、生精助阳、明目等功效。黄酮类化合物是枸杞子的有效组分之一，具有抗肿瘤[2]、抗氧化[3]、抗衰老[4]、清除自由基[5]、抗炎[6]等作用。目前，黄酮类化合物的提取方法主要有回流提取法[7-8]、超声提取法[9-10]、微波辅助提取法[11]及CO2超临界流体萃取法[12]。生物酶技术具有提取效率高、
提取时间短、绿色环保及提取条件温和等优势[13]，近年来在中药黄酮类、多糖类、生物碱类等有效组分提取中均有广泛应用。生物酶辅助提取枸杞子的有效组分虽有报道，但以研究提取枸杞子多糖[14-15]为主，而在提取枸杞子黄酮类成分方面报道甚少。本研究在单因素试验的基础上，采用响应面法优化复合酶提取枸杞子总黄酮的工艺，为枸杞子的综合利用及提高黄酮类化合物的提取率提供一定的试验基础。
1 仪器与试药
UV Blue Star B型紫外-可见分光光度计（北京莱佰泰科技有限公司），DD-5M离心机（湘仪离心机仪器有限公司），AL104型电子天平（METTLER TOLEDO，瑞士），HH-4電热恒温水浴锅（国华电器有限公司），AKRYUP-1816超纯水机（成都唐氏康宁科技发展有限公司），PHS-3E pH计（上海精密科学仪器有限公司）。
枸杞子（批号20150923），购于兰州黄河药市，经甘肃中医药大学药学院中药鉴定教研室杨扶德教授鉴定为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实；芦丁对照品（批号10080-200707），中国食品药品检定研究院；果胶酶（批号CNC1048446715）、纤维素酶（批号CNC1048447624），宁夏和氏璧生物技术有限公司；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 提取方法
称取枸杞子10.0 g，粉碎，过1号筛，加8倍量石油醚脱脂（2次，1.5 h/次），药渣风干。风干后的药渣装入烧杯，按照不同的酶用量、酶解温度、酶解时间，加入一定量磷酸缓冲液（pH=4.2）进行酶解提取，过滤，酶解提取后的药渣加10倍量水提取2次，1 h/次，提取液浓缩至浸膏（每1 mL浓缩液相当于0.5 g原药材），冷却，加无水乙醇至含醇量达65%，静置过夜，3500 r/min离心10 min，移取上清液5 mL置于50 mL容量瓶中，65%乙醇定容，作为待测溶液。
